[发明专利]禽流感(H5+H7)三价DNA疫苗的构建及其应用

说明书

本发明公开了一种禽流感病毒血凝素蛋白，其具有如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：3和/或SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列。本发明还公开了编码上述禽流感病毒血凝素蛋白的基因，所述基因具有如SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4和/或SEQ ID NO：6所示的序列。所述基因可用于制备针对当前流行的H5和H7型禽流感病毒的DNA疫苗。

技术领域

本发明属于分子生物学领域。具体而言，本发明提供一种表达H5亚型禽流感2.3.4.4h分支病毒、H5亚型禽流感2.3.4.4b分支病毒、H7N9禽流感病毒的禽流感血凝素蛋白(HA)的重组表达载体，包含有效量的上述重组表达载体的DNA疫苗，所述疫苗可以有效预防和/或治疗H5亚型2.3.4.4h分支、2.3.4.4b分支、H7N9禽流感病毒的感染。

背景技术

近年来，H5亚型和H7亚型高致病性禽流感病毒(Avian influenza virus，HPAIV)给一些国家的家禽养殖业、甚至是整个国民经济都造成了巨大的损失。H5亚型和H7亚型AI的爆发同样对公共卫生安全构成了严重的威胁。

AIV变异频繁，病毒表面糖蛋白血凝素HA基因是病毒基因组中变异率最高的分子，也是决定其抗原性的最主要的分子，并且在自然宿主中不断的发生着抗原漂移和抗原转变的进化和变异。国家禽流感参考实验室于2020～2021年上半年期间，在全国范围内进行了禽流感病毒的主动监测，从活禽市场和家禽养殖场分离到一系列H5和H7亚型禽流感病毒，其中病毒HA基因序列分析发现，H5亚型病毒主要分属于2.3.4.4h分支(原将其划分为2.3.4.4d分支)和2.3.4.4b分支，其中2.3.4.4h分支主要为H5N6亚型禽流感病毒，分布于广东、广西、福建、山东、贵州、湖南、浙江、江苏、安徽、辽宁、吉林、江西、云南、四川和新疆等15个省份，2.3.4.4b分支主要为H5N8亚型禽流感病毒，分布于江苏、浙江、河南、河北、广西、广东、湖南、江西、四川、山东、山西、陕西、北京和宁夏等14个省份(参见图11)；H7N9亚型禽流感病毒主要分布于河南、河北、山东、辽宁、内蒙古和云南等6个省份(参见图12)，给我国家禽养殖业和人类健康均构成威胁。

疫苗免疫是禽流感防控的关键措施之一，我国是国际上最早使用疫苗防治HPAIV的国家。DNA疫苗(DNA Vaccine)又称基因疫苗(Genetic Vaccine)、核酸疫苗(NucleicAcid Vaccine)，它是将编码目的抗原蛋白基因序列的质粒经肌肉注射导入宿主细胞，通过转录系统表达抗原蛋白，诱导宿主产生针对该抗原蛋白的免疫应答，从而达到免疫目的的新型基因工程疫苗，被称为“第三代疫苗”。DNA疫苗与传统疫苗相比，具有十分显著的优势。DNA疫苗能够同时诱导细胞免疫和体液免疫；不受母源抗体的影响，不会影响免疫检测；制备简单，对于变异频繁的病原，可以快速构建出抗原针对性的DNA疫苗，也可以任意组成联合疫苗和多价疫苗，还具有环境友好和可靠的生物安全性等特点，是未来人和动物预防与治疗疫苗重要的技术发展方向之一。因此，DNA疫苗被认为是防控流感的理想疫苗之一。

国家禽流感参考实验室研制的H5亚型禽流感DNA疫苗(H5亚型，pH5-GD)于2018年获得了国家一类新兽药证书((2018)新兽药证字26号)，这是我国获得批准的首个人和动物的DNA疫苗产品。由于禽流感病毒在不断的进化和变异，禽流感DNA疫苗(H5亚型，pH5-GD)不能对现有流行毒株提供完全有效的免疫保护，因此，需要不断地实时研制和更新针对新的变异毒株、抗原匹配性良好的新型DNA疫苗。

发明内容