[发明专利]一种微生物防治三七根腐病剂的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及一种微生物防治三七根腐病剂的制备方法及其应用，属于微生物农药技术领域。本发明的微生物防治三七根腐病剂，由保藏号为CCTCC NO：M 2018221的一株链霉菌(Streptomyces sp.)YIM PH20246经过二次发酵方法制备得到。本发明的微生物防治三七根腐病剂对三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌、腐皮镰刀菌及黄瓜萎蔫病菌均有较好的离体抑制活性，具有易重复生产，经济安全、绿色环保的优点，在三七根腐病的生物防治中具有潜在和实际的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种微生物防治三七根腐病剂的制备方法及其应用，属微生物农药技术领域。

背景技术

三七根腐病是典型的土传病害，土壤带菌是引发三七根腐病的重要因素，可导致根腐病的病原菌有真菌、细菌、线虫三大类，病原可单独致病或复合侵染，其中，腐皮镰孢菌、尖孢镰孢菌及草茎点霉菌等真菌是田间三七根腐病的主要致病菌。目前对三七根腐病的防治很大程度上还是依赖于使用有机氯、有机磷以及氨基甲酸酯等化学农药进行药剂灌根，由于农药的大量使用所导致的三七农药残留已严重地影响了三七的品质和药用价值。通过大量筛选和利用拮抗三七根腐病的有益微生物进行三七根腐病害的生物防治，具有经济安全、绿色环保的优势，是三七根腐病防治中重要而有效的途径。

放线菌是农用抗生素的重要产生菌，70％以上的农用抗生素由放线菌产生，链霉菌作为放线菌中的优势菌群，无论是分离自普通环境还是特殊生境的链霉菌，均能产生各种抗菌(真菌、细菌)生物活性物质。在植物病害的生物防治中起着非常重要的作用。在前期研究中，发明人筛选得到一株链霉菌，其发酵液具有较好拮抗三七根腐病原真菌活性，在三七根腐病的生物防治中具有潜在和实际的应用价值。

发明内容

本发明的目的是通过对一株链霉菌YIM PH20246菌株进行发酵研究，制备微生物防治三七根腐病剂。

本发明是这样实现的：

发明人在前期研究中，筛选得到一株具有抑制三七根腐病活性的链霉菌YIMPH20246(Streptomyces sp.YIM PH20246)，该菌株已于2018年4月19日保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉市武汉大学，保藏号为CCTCC NO：M 2018221。

本发明的微生物防治三七根腐病剂的制备方法包括以下步骤：

(1)试管种培养：将保藏号为CCTCC NO：M2018221的链霉菌YIM PH20246(Streptomyces sp.YIM PH20246)菌株接种到试管固体培养基斜面上，于28℃的温度下培养6天，获得菌株试管种。

其中，固体培养基配方为：酵母粉4.0g；葡萄糖4.0g；麦芽膏5.0g；复合维生素3.5mg；琼脂粉15.0g；水1000mL；pH 7.2。

(2)培养液体种子：采用500mL三角瓶摇瓶培养，先配制液体种子培养基，在每个三角瓶中装入100mL液体培养基，于120℃的温度下灭菌30分钟，冷却后接入1cm²大的菌株试管种，于28℃的温度下于转速为220rpm的摇床上培养2天，获得液体种子。

其中，液体种子培养基配方为酵母粉4.0g；葡萄糖4.0g；麦芽膏5.0g；复合维生素3.5mg；水1000mL；pH 7.2。

(3)制备微生物防治三七根腐病剂：采用1000mL三角瓶摇瓶培养，先配制液体发酵培养基，在每个三角瓶中装入200mL液体发酵培养基，于120℃的温度下灭菌30分钟，冷却后接入20mL上述步骤(2)中获得的液体种子，在28℃的温度下于转速为220rpm的摇床上培养6天后获得菌株发酵产物，在发酵产物中加入等体积乙醇，经转速为180rpm的摇床振荡6小时后滤去菌丝体，蒸干上清液中的乙醇得到菌株发酵提取物，将该发酵提取物加水稀释到原发酵液浓度，即为试验用微生物防治三七根腐病剂。