[发明专利]用于检测嗜吞噬细胞无形体抗体的重组蛋白rP44-18ES试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测嗜吞噬细胞无形体抗体的重组蛋白rP44-18ES试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括双抗原夹心法金标检测条，所述检测条包括底板，所述底板上沿层析方向依次设置样品垫、金标垫、分析膜和吸水垫，所述金标垫上设置有胶体金复合物，分析膜上设置有检测线和质控线；所述胶体金复合物包括胶体金标记的重组蛋白rP44-18ES和鼠IgG抗体，所述检测线包括重组蛋白rP44-18ES，所述质控线包括与鼠IgG抗体结合的抗体。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述与鼠IgG抗体结合的抗体包括兔源、羊源、马源、骆驼源抗鼠IgG抗体的多克隆抗体中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述样品垫和金标垫为玻璃纤维膜或聚脂膜。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述分析膜为硝酸纤维素膜。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述检测条的制备方法包括：

S1、金标垫的制备：分别制备重组蛋白rP44-18ES胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物，以及将所述重组蛋白rP44-18ES胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物复溶后进行混合，混合后浸泡玻璃纤维膜，将浸泡后的玻璃纤维膜于37℃烘干3～8小时后，制成金标垫；

S2、分析膜的制备：用稀释液分别配制浓度为1～3mg/mL的重组蛋白rP44-18ES稀释溶液和浓度为0.3～3mg/mL的与鼠IgG抗体结合的抗体稀释溶液；

将两种稀释溶液划线至硝酸纤维素膜上，重组蛋白rP44-18ES划线为所述检测条的检测线，与鼠IgG抗体结合的抗体划线为所述检测条的质控线，于37～45℃烘干14～24小时；所述稀释液为50mM Tris与2％蔗糖的混合物，所述稀释液pH为8.5～9；

S3、将所述样品垫与上述制备的金标垫、分析膜和吸水垫在所述底板上进行组装，然后根据规格切割，得到检测条。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述金标垫的制备方法包括：

重组蛋白rP44-18ES胶体金复合物和鼠IgG胶体金复合物的制备：分别取胶体金溶液100mL放入烧杯中，搅拌加入摩尔浓度为0.1～0.2M的K₂CO₃溶液调节胶体金溶液pH至6.5～9，分别加入所述重组蛋白rP44-18ES或鼠IgG抗体2～3mg，再加入0.5～1.3mg三乙醇胺和0.3～0.6mg蓝桉醇，室温搅拌15～30min；然后分别加入10～20mL金标封闭液对搅拌产物进行封闭，室温搅拌15～20min后12000rpm离心10min，将上清吸出弃去，所得沉淀物即为两种胶体金复合物；

复溶：将胶体金复合物分别用金标稀释液稀释，使得胶体金复合物分别溶解于所述金标稀释液中，胶体金复合物的浓度为10～250μg/mL，分别得到重组蛋白rP44-18ES胶体金复合物溶液和鼠IgG抗体胶体金复合物溶液；

金标垫制备：将所述重组蛋白rP44-18ES胶体金复合物溶液和鼠IgG抗体胶体金复合物溶液混合后浸泡玻璃纤维膜至有液体渗出，取出玻璃纤维膜，于37℃干燥3～8小时，形成金标垫。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述金标封闭液包括：磷酸盐缓冲液、质量浓度为0.2～1.0％的大分子蛋白及质量浓度为0.2～1.0％的Tween-20，所述磷酸盐缓冲液为pH 7.4、0.1M的PBS溶液，所述大分子蛋白为BSA、胎牛血清、脱脂奶中的任一种；

所述金标稀释液包括：20mM Tris、1wt％BSA、0.02wt％NaN₃、1wt％蔗糖的混合物。

8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述检测线和质控线间隔5～7mm。