[发明专利]一种同步测定细菌多糖中多糖和磷含量的定量核磁方法

权利要求书

1.一种同步测定细菌多糖中多糖和磷含量的定量核磁方法，其特征在于，利用六甲基磷酰三胺作为单一内标，包括如下过程：

(1)以六甲基磷酰三胺作为单一内标物，溶于氘代水中配制得到内标溶液；

(2)将细菌多糖样品加入到内标溶液中，获得检测样液；

(3)将检测样液装入核磁管中进行核磁检测，测得¹H-NMR图谱、³¹P-NMR图谱；然后通过细菌多糖的¹H-NMR特征峰的积分与内标物的¹H-NMR特征峰的积分进行关联换算，测得细菌多糖中多糖含量；同时，通过细菌多糖的³¹P-NMR特征峰的积分相应与内标物的³¹P-NMR特征峰的积分进行关联换算，测得细菌多糖中磷含量。

2.根据权利要求1所述的定量核磁方法，其特征在于，细菌多糖包括b型流感嗜血杆菌荚膜多糖、6A型肺炎链球菌荚膜多糖、6B型肺炎链球菌荚膜多糖、10A型肺炎链球菌荚膜多糖、11A型肺炎链球菌荚膜多糖、17F型肺炎链球菌荚膜多糖、18C型肺炎链球菌荚膜多糖、19A型肺炎链球菌荚膜多糖、19F型肺炎链球菌荚膜多糖、20型肺炎链球菌荚膜多糖、23F型肺炎链球菌荚膜多糖型肺炎链球菌荚膜多糖，以及上述多糖的降解物。

3.根据权利要求1所述的定量核磁方法，其特征在于，内标物的¹H-NMR特征峰的积分的范围为2.65-2.53ppm。

4.根据权利要求1-3任一项所述的定量核磁方法，其特征在于，细菌多糖的¹H-NMR特征峰的积分包括：

细菌多糖为b型流感嗜血杆菌荚膜多糖时，¹H-NM特征峰的积分的范围为4.27-4.20ppm；或者，细菌多糖为6A型肺炎链球菌荚膜多糖时，¹H-NMR特征峰的积分的范围为5.74-5.56ppm；或者，细菌多糖为6B型肺炎链球菌荚膜多糖时，¹H-NMR特征峰的积分的范围为5.74-5.56ppm；或者，细菌多糖为18C型肺炎链球菌荚膜多糖时，¹H-NMR特征峰的积分的范围为1.70-0.90ppm；或者，细菌多糖为19A型肺炎链球菌荚膜多糖时，¹H-NMR特征峰的积分的范围为5.52-5.38ppm；或者，细菌多糖为19F型肺炎链球菌荚膜多糖时，¹H-NMR特征峰的积分的范围为5.68-5.38ppm；或者，细菌多糖为23F型肺炎链球菌荚膜多糖时，¹H-NMR特征峰的积分的范围为1.65-1.00ppm。

5.根据权利要求1所述的定量核磁方法，其特征在于，内标物的³¹P-NMR特征峰的积分的积分范围为30.10-29.77ppm。

6.根据权利要求1所述的定量核磁方法，其特征在于，细菌多糖的³¹P-NMR特征峰的积分的范围为0.33-0.02ppm。

7.根据权利要求1所述的定量核磁方法，其特征在于，细菌多糖的¹H-NMR特征峰的积分与内标物的¹H-NMR特征峰的积分进行关联换算的过程如下：

其中，PS表示细菌多糖；IS表示内标物；w％_PS表示多糖含量；I表示定量峰积分值；N表示定量峰所含质子数；C表示检测液质量浓度，单位为mg/mL；M表示摩尔质量；w％_IS表示内标物六甲基磷酰三胺的纯度。