[发明专利]全血DNA提取试剂及提取方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及全血DNA提取试剂及提取方法。本发明提供的全血DNA提取试剂由裂解液、异丙醇、磁珠悬液、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ、洗脱液、蛋白酶K组成。其中裂解液由胍类化合物、三羟甲基氨基甲烷、稳定剂和表面活性剂组成。该试剂操作简便，可在自动化核酸提取仪上一步法实现样本裂解、核酸与磁珠结合，所得基因组DNA含量高，完整度好，纯度高，并可同时完成1‑96个样本提取，实现快速、高通量、完全自动化的提取纯化核酸。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及全血DNA提取试剂及提取方法。

背景技术

随着分子生物学技术飞速发展，基因组水平上的研究已成为研究热点。分子生物学的很多常规实验都需要以提取基因组DNA为前提，无论是PCR扩增、基因测序、还是构建基因组文库，都需要提取基因组DNA，且提取到的基因组DNA质量会直接影响下游分子生物学实验。随着现代疾病诊断技术和精准医疗的蓬勃发展，需要处理的样品量日益增多，因此高效、可靠、高通量的DNA提取方法成为相关研究领域的迫切需求。

目前基因组DNA提取纯化的方法有多种，如苯酚氯仿抽提法、SDS法、离心柱法和磁珠法，这些方法各有优缺点。并且基于以上方法研究的全血DNA提取试剂盒种类繁多，但当前的全血DNA提取试剂盒提取时存在诸多缺点，如样本需要前处理且处理时间长、提取过程复杂、提取过程耗时较长、易造成样本间的交叉污染等。当样本量较多时，易出错且浪费大量的时间及人力物力。

自动化核酸提取仪是应用配套的核酸提取试剂来自动完成样本核酸的提取工作的仪器，核酸提取仪分为两类：一类是大型自动化仪器，一般称为自动液体工作站，其价格昂贵运行成本高，适合一次提取几千个同一种类标本。另一类是小型自动化提取仪器，其利用封装好的配套试剂自动完成提取纯化过程，其设备价格低、运行成本也较低，并且操作方便，因此得到了越来越多的应用。

小型自动化提取仪器的配套试剂对提取效果存在显著的影响，而目前仅有少数试剂盒可实现高通量、自动化的提取，且细胞裂解和与磁珠结合的步骤必须分开进行，并未实现完全自动化。因此，为更有效的配合磁珠法提取核酸的使用，提供高通量、完全自动化的全血DNA提取试剂势在必行。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供高通量、完全自动化的全血DNA提取试剂及提取方法

本发明提供的全血DNA提取试剂，包括裂解液、磁珠、异丙醇、洗涤液I、洗涤液Ⅱ、洗脱液和蛋白酶K；

所述裂解液包括：胍类化合物、三羟甲基氨基甲烷、稳定剂和表面活性剂；

所述洗涤液I包括：胍类化合物、三羟甲基氨基甲烷、稳定剂、表面活性剂和异丙醇；

所述洗涤液Ⅱ为乙醇水溶液；

所述洗脱液包括三羟甲基氨基甲烷。

本发明提供的全血DNA提取试剂操作简便，可在自动化核酸提取仪上一步法实现样本裂解、核酸与磁珠结合，所得基因组DNA含量高，完整度好，纯度高，并可同时完成1～96个样本提取，实现快速、高通量、完全自动化的提取纯化核酸。

本发明中，所述裂解液由水和1M～10M胍类化合物、10mM～50mM三羟甲基氨基甲烷、5mM～50mM稳定剂、1vol％～10vol％表面活性剂组成。

本发明中，所述洗涤液I由水和0.5M～5M胍类化合物、0.1M～1M氯化钠、1mM～10mM稳定剂、5mM～20mM三羟甲基氨基甲烷、0.5vol％～10vol％表面活性剂、40vol％～80vol％异丙醇组成。

一些实施例中，所述胍类化合物为盐酸胍或异硫酸氰胍中至少一种。所述表面活性剂选自Tween-20、Triton X-100、NP-40中至少一种。所述稳定剂选自EDTA或柠檬酸钠。