[发明专利]全血DNA提取试剂及提取方法在审
| 申请号： | 202111487583.1 | 申请日： | 2021-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN113913421A | 公开（公告）日： | 2022-01-11 |
| 发明（设计）人： | 吴玉景;黄明贤;任辉 | 申请（专利权）人： | 苏州海狸生物医学工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 常亮 |
| 地址： | 215000 江苏省苏州市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | dna 提取 试剂 方法 | ||
1.全血DNA提取试剂，其特征在于，包括裂解液、磁珠、异丙醇、洗涤液I、洗涤液Ⅱ、洗脱液和蛋白酶K；
所述裂解液包括：胍类化合物、三羟甲基氨基甲烷、稳定剂和表面活性剂；
所述洗涤液I包括：胍类化合物、三羟甲基氨基甲烷、稳定剂、表面活性剂和异丙醇；
所述洗涤液Ⅱ为乙醇水溶液；
所述洗脱液包括三羟甲基氨基甲烷。
2.根据权利要求1所述的全血DNA提取试剂，其特征在于，所述裂解液由水和1M～10M胍类化合物、10mM～50mM三羟甲基氨基甲烷、5mM～50mM稳定剂和1vol％～10vol％表面活性剂组成。
3.根据权利要求1所述的全血DNA提取试剂，其特征在于，所述洗涤液I由水和0.5M～5M胍类化合物、0.1M～1M氯化钠、1mM～10mM稳定剂、5mM～20mM三羟甲基氨基甲烷、0.5vol％～10vol％表面活性剂和40vol％～80vol％异丙醇组成。
4.根据权利要求1～3任一项所述的全血DNA提取试剂，其特征在于，所述胍类化合物为盐酸胍或异硫酸氰胍中至少一种；所述稳定剂选自EDTA或柠檬酸钠中至少一种；所述表面活性剂选自Tween-20、Triton X-100、NP-40中至少一种。
5.根据权利要求1所述的全血DNA提取试剂，其特征在于，所述磁珠为氧化硅羟基纳米磁珠。
6.根据权利要求1所述的全血DNA提取试剂，其特征在于，所述洗涤液II为体积分数为60％～100％的乙醇水溶液。
7.根据权利要求1所述的全血DNA提取试剂，其特征在于，所述洗脱液的pH值为7.0～9.0，其中，三羟甲基氨基甲烷的浓度为0.1mM～50mM。
8.一种全血DNA的提取方法，其特征在于，包括：
步骤1：将全血、蛋白酶K、裂解液、异丙醇和磁珠混合，孵育反应后，分离磁珠；
步骤2：将步骤1分离出的磁珠依次经洗涤液I、洗涤液II洗涤后，以洗脱液洗脱后，分离磁珠取上清液，获得全血DNA溶液。
9.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，全血、蛋白酶K、裂解液、异丙醇和磁珠的体积比为200:10:300:300:10。
10.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，
步骤1所述孵育反应的条件包括55℃孵育5min，然后结合反应5min；
步骤2所述洗脱的条件包括55℃孵育5min。
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