[发明专利]一种靶向ROR1和CD33的双特异性嵌合抗原受体(CAR)及其应用

说明书

本发明提供了一种靶向ROR1和CD33的双特异性嵌合抗原受体(CAR)及其应用，具有如下结构：ROR1 scFv‑CD33 scFv‑H‑TM‑C‑CD3ζ，其中“‑”为连接肽或肽键；H为铰链区；TM为跨膜结构域；C为共刺激信号分子；CD3ζ为胞内信号传导序列。该嵌合抗原受体能够在体内、体外抑制肿瘤生长，延长生存周期，促进细胞因子分泌，发挥协同抗肿瘤作用。

技术领域：

本发明属于肿瘤免疫治疗领域，具体提供了一种靶向ROR1和CD33的双特异性嵌合抗原受体(CAR)及其制备抗肿瘤药物的应用。

背景技术：

目前，癌症已成为全球范围内致死率最高的疾病之一，但是现有的手术切除和放化疗等手段对早期肿瘤的治疗效果较好，却难以治疗中晚期患者，而且还会引起患者严重的不良反应，影响患者生活质量，增加患者及其家庭负担。近年来，随着肿瘤免疫治疗的发展，嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor T Cells，CART)疗法在抗癌方面取得了巨大的成功。这一疗法最初由Gross和他的同事于1989年提出，他们将抗体的抗原结合区scFv与CD3-ζ链或FcεRIγ的胞内部分融合形成嵌合抗原受体。CAR的基本结构包括一个肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen,TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段)，一个胞外铰链区(Hinge area)，一个跨膜区(Transmembrane region)和一个胞内免疫受体酪氨酸活化基序(Immunoreceptor tyrosine-based activation motif,ITAM)。随后，研究人员为了提高CART的抗肿瘤能力，在Gross等人的研究基础上添加了共刺激信号分子，使得CART对肿瘤细胞的杀伤能力大幅度加强，并在血液肿瘤治疗方面取得了成功，2017年诺华公司的Kymiriah(CLT-019和Kite制药(已被吉利德公司收购)的Yescarta(KTE-C10)先后被美国FDA批准上市，2019年中国首款CAR-T疗法阿基仑赛注射液(复星凯特)也被批准上市，掀起了针对嵌合抗原受体相关抗肿瘤药物的研究热潮。

早期的CART细胞多以CD19为治疗靶点，但是后续发现CD19不仅在肿瘤细胞中表达，在正常细胞中也有相对高的表达量，造成了CART细胞的“误判”而攻击正常细胞，诱发毒性反应。为此，研究人员开始尝试寻找新的治疗靶点，并且试图通过构建双特异性CART细胞降低脱靶现象的出现，及同时靶向两个抗肿瘤位点，提高识别特异性。