[发明专利]一种合成香兰素的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一种合成香兰素的基因工程菌，其包括由香草酸合成天然香兰素的途径：香草酸在羧酸还原酶Car和磷酸泛酰巯基乙胺转移酶Sfp的催化作用下生成天然香兰素。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌为含有编码羧酸还原酶的基因Car和编码磷酸泛酰巯基乙胺转移酶的基因Sfp的合适宿主生物体。

3.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述编码羧酸还原酶的基因Car包括来源于艾阿华诺卡氏菌的基因Car、来源于海分枝杆菌的基因Car以及基于上述基因的序列的不引起所述羧酸还原酶功能改变的基因取代、缺失、加入或密码子优化；优选地，所述编码羧酸还原酶的基因Car包括来源于艾阿华诺卡氏菌的基因Car或来源于艾阿华诺卡氏菌且经过密码子优化的基因Car、来源于海分枝杆菌的基因Car或来源于海分枝杆菌且经过密码子优化的基因Car。

4.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述编码磷酸泛酰巯基乙胺转移酶基因Sfp包括来源于艾阿华诺卡氏菌的基因Sfp、来源于海分枝杆菌的基因Sfp、来源于枯草芽孢杆菌的基因Sfp以及基于上述基因的序列的不引起所述磷酸泛酰巯基乙胺转移酶功能改变的基因取代、缺失、加入或密码子优化；优选地，所述编码磷酸泛酰巯基乙胺转移酶基因Sfp包括来源于艾阿华诺卡氏菌的基因Sfp或来源于艾阿华诺卡氏菌且经过密码子优化的基因Sfp、来源于海分枝杆菌的基因Sfp或来源于海分枝杆菌且经过密码子优化的基因Sfp、来源于枯草芽孢杆菌的基因Sfp或来源于枯草芽孢杆菌且经过密码子优化的基因Sfp。

5.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述合适宿主生物体包括大肠杆菌BL21(DE3)、酿酒酵母S288C、毕赤酵母X-33、亚罗酵母ATCC:MYA-2613和谷氨酸棒状杆菌ATCC:13032。

6.一种利用权利要求1-5中任意一项所述的合成香兰素的工程菌由香草酸合成天然香兰素的方法，其包括：将合成香兰素的基因工程菌接入发酵培养基，进行发酵培养，然后对所获得的发酵培养液进行分离纯化，制得香兰素。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵培养的底物香草酸浓度为1.0-30.0g/L，优选为1.0-10.0g/L；和/或，发酵培养的过程中，葡萄糖补加量为1.0-40.0g/L，优选为4.0-20.0g/L。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵培养的培养转速为100-400rpm，优选为150-300rpm。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，发酵培养的菌体富集倍数为1-20倍，优选为3-10倍。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，发酵培养的过程中，诱导时间为2-16小时，优选为4-16小时。