[发明专利]一种软骨藻酸毒素荧光微球免疫层析检测试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种软骨藻酸毒素荧光微球免疫层析检测试纸条及其制备方法和应用，属于食品安全检测技术领域。本发明提供的检测试纸条由依次连接并固定于底板上的样品垫、结合垫、设有检测线和质控线的层析膜以及吸水垫组成，其中检测线包被软骨藻酸毒素‑载体偶联物，质控线处包被二抗，结合垫包被荧光微球标记的软骨藻酸毒素抗体。本发明提供的检测试纸条具有操作简便，设备简易便宜，不需要专业人员操作等优势；本发明通过荧光读数仪进行定量检测，能够快速灵敏、稳定准确并定量检测水产品或食品中软骨藻酸毒素的含量。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种软骨藻酸毒素荧光微球免疫层析检测试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

软骨藻酸(Domoic acid，DA)是记忆缺失性贝毒(Amnesia shellfish poisoning，ASP)的主要成分，是由海洋硅藻的拟菱形藻属(Pseudonitzschia)和菱形藻属(Nitzschia)产生的一种强烈的神经性毒素。文献显示DA竞争性地与谷氨酸受体结合后，导致细胞产生一系列的错误指令，从而导致神经细胞死亡或细胞坏死。DA可在鱼贝类体内富集，并通过食物链传递作用转移给高能量级的动物，造成动物死亡，或转移给人类。当人体内的毒素达到一定浓度即可产生呕吐、腹泻和腹痛等中毒症状，严重者能导致短期记忆功能的丧失，甚至导致死亡。据报道，在北美(加拿大和美国)、欧洲及亚洲(日本)等地发生了人或水生动物因误食被DA毒素污染的海产品，而引发的中毒事件。在我国，也有相关的疑似DA中毒事件的报道，并且最近有文献报道在中国海域的菱形藻可检测到DA毒素。目前，已有多个国家(包括加拿大、日本和部分欧洲国家)制定了DA的安全限量标准，为20μg/g贝肉。在我国，目前还未能形成健全的DA毒素安全性评价方案，及海产品中DA的安全限量标准。

目前，国内外有关于DA检测方法主要有小鼠生物检测法、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法和色谱联用法等仪器分析方法。这类仪器分析方法准确、稳定、灵敏，但耗时、设备昂贵，前处理方法繁琐，需要专业人员操作，不适用于实际生产生活中。此外，快捷简便且灵敏的免疫检测技术是目前市场上应用最广泛的，主要有酶联免疫吸附法、免疫层析法等。其中根据酶联免疫吸附法(ELISA)的原理DA检测目前已经有相关专利报道，如中国专利申请号201010283454.6和中国专利申请号201210157875.3。相比较而言，免疫层析方法简单快速，结果直观，且不需要专业分析人员，特别适合现场监测。然而，目前的检测试纸条具有检测灵敏度低，且仅能定性检测，严重影响了市场应用。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种软骨藻酸毒素荧光微球免疫层析检测试纸条，兼具ELISA和胶体金试纸条的快速、稳定、操作简便的同时，具有较高的检测灵敏度。

本发明提供了一种软骨藻酸毒素荧光微球免疫层析检测试纸条，所述试纸条包括底板和由下向上依次粘贴在底板上的样品垫、结合垫、层析膜和吸水纸；

其中在层析膜上由下向上依次设置有检测线T和质控线C；所述检测线T包被有软骨藻酸毒素-载体偶联物，所述质控线C包被抗软骨藻酸毒素抗体的抗体；

在结合垫上包被有荧光微球标记的软骨藻酸毒素抗体。

优选的，所述软骨藻酸毒素-载体偶联物的包被浓度为0.5～1.5mg/mL。

优选的，所述抗所述荧光微球标记的软骨藻酸毒素抗体的抗体的包被浓度为0.5～1.0mg/mL。

优选的，所述荧光微球标记的软骨藻酸毒素抗体的包被浓度为20～30μg/mg。

优选的，所述荧光微球标记的软骨藻酸毒素抗体的制备方法，包括以下步骤：

以软骨藻酸毒素抗体和所述荧光微球在偶联活化剂作用下进行偶联反应，经封闭，得到以酰胺键共价结合的荧光微球标记的软骨藻酸毒素抗体。

优选的，所述偶联反应的温度为20～28℃；