[发明专利]一种分子马达的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种分子马达的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

1)取培养后的细菌接种至培养基中再次培养；

2)将步骤1)再次培养得到的细菌离心收集菌体，用缓冲液A重悬菌体，多次破碎后得到细胞破碎液；

3)将步骤2)得到的细胞破碎液通过差速离心法和密度梯度离心法进行提取纯化，得到分子马达；

或者，所述制备方法包括以下步骤：

a)取培养后的细菌，离心收集菌体细胞；

b)用缓冲液B悬浮步骤a)得到的菌体细胞；

c)加入PMSF，冰浴超声破碎，第一次离心得到上清液，将上清液进行第二次离心，去除离心后的上清液，得到含有F₁F₀-ATP酶的复合体；

其中，步骤1)与步骤a)中所述的细菌为嗜热菌。

2.根据权利要求1所述的一种分子马达的制备方法，其特征在于，所述的嗜热菌包括嗜热栖热菌，嗜热玫瑰球菌，嗜热芽胞杆菌，嗜热链球菌，硫矿硫化叶菌，海栖热袍菌，火球菌中的一种，嗜热菌的接种比例为1:98-105。

3.根据权利要求1或2所述的一种分子马达的制备方法，其特征在于，步骤2)中，所述的缓冲液A包括以下原料：0.1-0.8mol/L PBS pH8.0，0.1-20mmol/L MgCl₂，0.1-5mmol/LDTT。

4.根据权利要求1或2所述的一种分子马达的制备方法，其特征在于，步骤b)中，所述的缓冲液B包括以下原料：45-55mM的Tricine-NaOH，pH7.8-8.2，0.2-0.3M的蔗糖溶液，3-5mM的MgCl₂溶液。

5.根据权利要求1或2所述的一种分子马达的制备方法，其特征在于，步骤3)中，差速离心法为1-6℃、600-3000×g下离心40分钟，取上清液以100，000-200，000×g，离心30-90min；密度梯度离心法为：取差速离心法得到的沉淀加入到质量百分比浓度分别为20％，30％，40％，50％，60％的蔗糖溶液，以150，000-300，000×g，60-90min，1-6℃条件下超速离心，收集蔗糖溶液的质量百分比浓度为40％-50％区域的液体。

6.根据权利要求1或2所述的一种分子马达的制备方法，其特征在于，步骤c)中，PMSF的终浓度为1mmol/L，超声破碎的条件为：振幅为40-60％，超声5-10s，停6-10s，时间25-35min。

7.根据权利要求1或2所述的一种分子马达的制备方法，其特征在于，步骤c)中，第一次离心是在20，000×g下离心25-35min，第二次离心是在180，000×g下离心85-95min。

8.一种如权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的分子马达的应用，其特征在于，所述分子马达在化妆品领域的应用。

9.根据权利要求8所述的分子马达的应用，其特征在于，所述分子马达在制备用于紧致抗衰老的化妆品中的用途。

10.根据权利要求9所述的分子马达的应用，其特征在于，所述分子马达可抑制MMP-1、MMP-9活性。

11.根据权利要求9所述的分子马达的应用，其特征在于，所述分子马达可促进生长因子GDF11和TGF-β1的表达作用。

12.根据权利要求9所述的分子马达的应用，其特征在于，所述分子马达可抑制Bax基因的表达作用以及促进Bcl-2的表达作用。

13.根据权利要求9所述的分子马达的应用，其特征在于，所述分子马达可减少rDNA拷贝数丢失，呈现对表皮和真皮组织一定的抗紫外损伤、促增殖、抗凋亡、抗衰老以及使皮肤紧致相关的作用。