[发明专利]一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养基及培养方法

权利要求书

1.一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，包括：蔗糖70-90g/L、木薯淀粉水解液10-20g/L、酵母粉10-15g/L、玉米浆水解液3-5g/L、硫酸镁1.5-2.5g/L、磷酸二氢钾2-3g/L、磷酸氢二钠4-6g/L、氯化钙10-20mg/L、硫酸铜1-1.5mg/L、硫酸锰6-15mg/L、消泡剂0.1-1g/L，余量为水。

2.根据权利要求1所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，所述木薯淀粉水解液是将木薯淀粉浆料糊化后用淀粉酶水解得到。

3.根据权利要求1所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，所述木薯淀粉水解液的制备方法为：先将木薯淀粉加入pH为6-6.5的缓冲液中得到固含量为6-15％的木薯淀粉浆料，然后加入氯化钙直至钙离子浓度为0.005-0.01mol/L，在90-95℃下加热糊化，冷却至50-55℃，然后加入β-淀粉酶酶解15-20h，高温灭酶后过滤，收集上清液，即得；优选地，所述β-淀粉酶的用量为木薯淀粉质量的0.3-0.8％。

4.根据权利要求1所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，所述玉米浆水解液是由浓硫酸对玉米浆进行高温水解得到。

5.根据权利要求1所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的发酵培养基，其特征在于，所述玉米浆水解液的制备方法为：将玉米浆与硫酸溶液按体积比为1：(1-3)混合均匀，然后在110-120℃下水解10-15h，然后将pH调至6-7，过滤，收集上清液，即得；优选地，所述玉米浆的固含量为40-50％，所述硫酸溶液的质量浓度为20-30％。

6.一种利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养方法，其特征在于，包括下述步骤：

S1、取适量保藏的兽疫链球菌菌种接种到斜面培养基中进行活化培养；

S2、取适量活化后的兽疫链球菌菌种接种到种子培养基中进行培养，得到兽疫链球菌种子培养液；

S3、将兽疫链球菌种子培养液接种到权利要求1-5任一项所述的发酵培养基中进行发酵，发酵时间为20-30h，在发酵开始后第4-6h时添加一次槐糖脂，发酵结束后，得到含玻尿酸的发酵液。

7.根据权利要求6所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养方法，其特征在于，S1中，培养温度为35-37℃，培养时间为15-18h；S1中，斜面培养基包括：蔗糖1.5-2g/L、酵母粉5-12g/L、磷酸氢二钾3-5g/L、硫酸镁0.5-1g/L、琼脂18-20g/L。

8.根据权利要求6所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养方法，其特征在于，S2中，培养温度为35-37℃，转速为150-180r/min，培养时间为15-18h；S2中，种子培养基包括：蔗糖15-30g/L、酵母粉25-40g/L磷酸氢二钾3-5g/L、硫酸镁0.5-1g/L、谷氨酸1-1.5g/L。

9.根据权利要求6所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养方法，其特征在于，S3中，槐糖脂的添加量为所述发酵培养基质量的0.05-0.1％。

10.根据权利要求6所述的利用链球菌菌株生产玻尿酸的培养方法，其特征在于，S3中，兽疫链球菌种子培养液的接种量为4-6％；S3中，发酵温度为34-36℃，转速为300-400r/min，通气量为0.6-1vvm。