[发明专利]一种固定化载体、D-乙酰亮氨酸脱乙酰固定化酶及制备方法

权利要求书

1.一种固定化载体，其特征在于，包括质量比为1～3:2～4:4～6的甘草酸二钾、脱乙酰壳多糖以及硅藻土制备的载体；所述载体置于质量浓度为4.5～5.5％的戊二醛溶液中固定8～12h得到固定化载体。

2.根据权利要求1所述的固定化载体，其特征在于，所述载体通过以下方法制备：配置1～3％甘草酸二钾溶液，室温条件下将1～3％甘草酸二钾溶液滴入2～4％脱乙酰壳多糖和4～6％硅藻土的混合液中，搅拌2～4小时，过滤，清洗后得到载体。

3.一种如权利要求1所述的固定化载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(S1)：配置1～3％甘草酸二钾溶液，室温条件下将1～3％甘草酸二钾溶液滴入2～4％脱乙酰壳多糖和4～6％硅藻土的混合液中，搅拌2～4小时，过滤，清洗后得到载体；

(S2)：取步骤(S1)制备的载体，加入到4～8倍质量比的4.5～5.5％的戊二醛溶液中，室温条件下150～200r/min搅拌反应8～12h，以蒸馏水充分清洗，过滤得到固定化载体。

4.一种D-乙酰亮氨酸脱乙酰固定化酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(SS1)：配置1～3％甘草酸二钾溶液，室温条件下将1～3％甘草酸二钾溶液滴入2～4％脱乙酰壳多糖和4～6％硅藻土的混合液中，搅拌2～4小时，过滤，清洗后得到载体；

(SS2)：取步骤(S1)制备的载体，加入到4～8倍质量比的4.5～5.5％的戊二醛溶液中，室温条件下150～200r/min搅拌反应8～12h，以蒸馏水充分清洗，过滤得到固定化载体；

(SS3)：：取步骤(SS2)制备的固定化载体，加入D-乙酰亮氨酸脱乙酰酶溶液，4～10℃条件下150～200r/min搅拌8～12h，过滤，并用蒸馏水充分清洗后得到固定化酶。

5.根据权利要求4所述的D-乙酰亮氨酸脱乙酰固定化酶的制备方法，其特征在于，所述D-乙酰亮氨酸脱乙酰酶溶液通过以下方法制备：将重组表达D-乙酰亮氨酸脱乙酰酶的工程菌发酵液离心，收集得到菌泥，将菌泥混悬于6～10倍质量比的磷酸盐缓冲液溶液中，进行高压均质，制备得到破壁粗酶溶液。

6.根据权利要求4所述的D-乙酰亮氨酸脱乙酰固定化酶的制备方法，其特征在于，步骤(SS1)中，所述脱乙酰壳多糖的分子量为50w～100w。

7.根据权利要求所述的D-乙酰亮氨酸脱乙酰固定化酶的制备方法，其特征在于，所述高压均质的条件为：压力500～600Mpa，时间3～5分钟。