[发明专利]马流产沙门氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种马流产沙门氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由保藏编号为CGMCCNo.21990的杂交瘤细胞株分泌产生的抗马流产沙门氏菌FljB蛋白的单克隆抗体。此外，本发明还建立了马流产沙门氏菌竞争ELISA抗体检测方法，与TAT方法相比，本发明建立的竞争ELISA方法的敏感性更高：对标准阳性血清能检测到的最大稀释度为32倍稀释，TAT检测最大稀释度为原倍。竞争ELISA方法的特异性更好：与常见的马传贫、马流感、马鼻肺炎、马动脉炎等病毒病以及马腺疫、鼠伤寒沙门氏菌感染、都柏林沙门氏菌感染等细菌病的血清抗体均不反应，仅与马流产沙门氏菌特异性抗体反应。因此，本发明的提出为马流产沙门氏菌抗体的检测提供了一种新的技术手段。

技术领域

本发明涉及一种马流产沙门氏菌抗体检测试剂盒及其应用。特别涉及一种马流产沙门氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒及其应用。本发明属于生物技术领域。

背景技术

马流产沙门氏菌病(Equine abortus Salmonellosis)是由马流产沙门氏菌引起的一种以孕马流产为主要特征的马属动物传染病，又名为马副伤寒(Equi parathphoid)或马沙门氏菌性流产。该病易感染初产母畜，多数母畜在发生流产前，一般无明显临床症状，突发流产，绝大多数为死胎，有少数存活的胎儿，在出生几天后，也会发生死亡。妊娠母马流产时，病菌随流产胎儿、胎衣、羊水及阴道分泌物排出体外,病公马(驴)能随精液排菌。

近年来，该病在我国华东、华北和西北等地区爆发流行，主要引起马、驴的流产，流产率为20-100％。前期实验室研究，将流产马驹胎儿脏器组织进行细菌的分离鉴定，结果均为马流产沙门氏菌(Salmonella abortus equi,S.abortus.equi)。但该病在国内、外的研究较少，缺乏特异性的检测技术，我国《马流产沙门氏菌病诊断技术(NY/T 570-2002)》行业标准(行标)中提及该病的血清学检测方法为试管凝集试验(TAT)，该方法可用于检测马流产沙门氏菌抗体，但在个别情况下，也可能检出沙门氏菌的其他血清型抗体，比如鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium,S.typi)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,S.enteritidis)、都柏林沙门氏菌(Salmonella dublin，S.dublin)等沙门氏菌的抗体，特异性不强；采用试管进行操作、样品需要多个稀释度，无法满足大规模样品检测的需要。

所以，为了应对疫情的连年爆发，亟需建立一种特异性强、敏感性高和高通量的检测方法。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种分泌抗马流产沙门氏菌 (Salmonella abortusequi,S.abortus.equi)FljB蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株以及由该杂交瘤细胞株分泌产生的单克隆抗体；

本发明的目的之二在于提供以上所述的单克隆抗体在检测马流产沙门氏菌抗体试剂中的用途。

本发明的目的之三在于提供一种马流产沙门氏菌竞争ELISA抗体检测试剂盒及其检测方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明通过体外融合表达FljB蛋白，得到了多株抗FljB蛋白的单克隆抗体，通过筛选竞争性单克隆抗体、优化反应条件和反应策略，最终建立了竞争ELISA (C-ELISA)抗体检测方法。该方法的反应原理为：以单克隆抗体进行包被，待检血清与HRP标记的FljB蛋白同时加入到ELISA板的反应孔内，37℃作用30分钟后，读取OD450的吸光值，通过计算抑制率进行检测结果的判定。