[发明专利]粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44-60及含有该抗原的试剂盒

说明书

本发明提供一种粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44‑60及含有该抗原的试剂盒，属于免疫学技术领域，该重组抗原蛋白包括序列表SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。该试剂盒包括重组抗原蛋白rP44‑60，样品垫，结合垫，吸收垫，硝酸纤维素膜，胶体金探针，鼠IgG和羊抗鼠IgG。本发明的重组抗原蛋白灵敏度高，特异性强，能快速检测嗜吞噬细胞无形体感染血清中的抗体，改善了HGA因抗原变异导致抗体难捕捉的问题，弥补现有抗原漏检的缺陷，有效降低漏诊率；其制备方法减少了无关序列造成的交叉反应性，重组抗原蛋白表达量和稳定性高；该试剂盒具有快速、灵敏、特异性高、不受实验条件限制等特点，对检测条件要求低。

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44-60及含有该抗原的试剂盒。

背景技术

人粒细胞无形体病(Human granulocytic anaplasmosis，HGA)是由嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)侵染人末梢血中性粒细胞引起，以发热伴白细胞、血小板减少和多脏器功能损害为主要临床表现的蜱传疾病。该病是由一种寄生于细胞内的寄生菌，主要通过蜱叮咬传播的。该病的潜伏期为1-2周，大多急性起病，持续高热，发热可达40℃以上。该病的临床表现主要为全身不适、乏力、头痛、肌肉酸痛、恶心、呕吐、厌食、腹泻等，可能伴有心肝肾等多脏器功能损害，严重时可导致死亡。

目前，HGA是国际关注度较高的一种新发人兽共患性传染病，已成为公共卫生问题。研究发现，在美国及欧洲大多数国家中，有蜱类存在的地区，往往嗜吞噬细胞无形体感染率比较高。此外，有些哺乳动物也可能是嗜吞噬细胞无形体的储存宿主，例如美国发现的白足鼠、白尾鹿，欧洲的红鹿、牛、山羊等。我国于2008年在安徽省首次证实HGA的存在。卫生部《指南》中提到，我国曾在黑龙江、内蒙古和新疆等地的全沟硬蜱中检测到嗜吞噬细胞无形体。

嗜吞噬细胞无形体的早期检测对控制其传播具有重要意义，因此其鉴别检测显得尤为重要。由于HGA无任何特异性临床症状，因此常用血清学检测方法进行检测。血清学检测方法是以嗜吞噬细胞无形体来源的特异性种属蛋白为检测抗原，检测被感染对象血清中抗该病原菌的特异性抗体，从而判断受试者是否感染嗜吞噬细胞无形体，而特异性抗原则是检测优劣的关键所在。目前，血清学检测方法所使用的检测抗原均为嗜吞噬细胞无形体外膜蛋白P44。但由于无形体基因组中存在p44多基因家族的重复序列，相同性基因间容易产生交换，从而使机体出现不同的P44外膜蛋白产生抗原变异，如分别使用受感HL60和THP-1培养细胞抗原时，受感HL60细胞可表达多种p44克隆体mRNA，而受感THP-1仅表达2种p44克隆体mRNA(P44-47E和P44-60)。可见，在不同组织培养细胞中，嗜吞噬细胞无形体菌体表面产生不同的P44外膜蛋白。上述的抗原变异会加大检测难度，存在漏检的缺陷，因此现有抗原的检测灵敏度只能达到80-90％，检测灵敏度有待提高。

为解决HGA血清检测中抗体检测困难、存在漏检缺陷、缺乏高灵敏度高特异性的血清检测试剂、检测难以在基层推广等问题，提供一种重组抗原蛋白，以加强粒细胞无形体病检测方法的优化，对医学、公共卫生及畜牧业领域具有十分重要的现实意义。

发明内容

本发明提供一种粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44-60，用以解决HGA血清检测中抗体检测困难、存在漏检缺陷、缺乏高灵敏度高特异性的血清检测试剂的问题。本发明提供的重组抗原蛋白灵敏度高，特异性强，能快速检测嗜吞噬细胞无形体感染血清中的特异抗体，，改善了HGA因抗原变异导致抗体难捕捉的问题，弥补现有抗原漏检的缺陷，有效降低漏诊率，有利于加强粒细胞无形体病检测方法的优化，对医学、公共卫生及畜牧业领域具有十分重要的现实意义。

第一方面，本发明提供一种粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44-60，包括：序列表SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

进一步地，上述重组抗原蛋白rP44-60由上述序列表SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成。