[发明专利]粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44-60及含有该抗原的试剂盒

权利要求书

1.一种粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44-60，其特征在于：所述重组抗原蛋白rP44-60由序列表SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成。

2.根据权利要求1所述的重组抗原蛋白rP44-60，其特征在于：所述重组抗原蛋白rP44-60在制备用于检测嗜吞噬细胞无形体抗体的试剂盒中的用途。

3.一种权利要求1或2所述的重组抗原蛋白rP44-60的制备方法，其特征在于：包括：

p44基因的RT⁃PCR扩增、纯化及回收，得到回收产物；

将所述回收产物与pCR2.1载体连接后，转化至感受态细胞DH5α中进行诱导表达，并测序和筛选出含有rP44-60序列的目的基因；

将所述目的基因连接到载体pTD1上，并再次转化至感受态细胞DH5α中进行克隆培养，然后提取、鉴定和收集阳性重组质粒；以及，

将所述阳性重组质粒测序后，合成目标蛋白并纯化，即得重组抗原蛋白rP44-60。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述RT⁃PCR扩增步骤中，PCR扩增进行了两轮，两轮PCR扩增条件相同，具体如下：94℃预变性30s-5min，94℃变性30-60s，55-60℃退火30-60s，72℃延伸1-2min，反应45个循环。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述诱导表达步骤用培养基为：含有1mM的IPTG和1mM的X⁃gal的平板培养基；所述克隆培养步骤用培养基为：含有100μg/mL的Ampicillin抗生素的选择培养基。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述平板培养基和所述选择培养基均为含有0.002-0.010g/L的L-异亮氨酸叔丁酯盐酸盐和0.001-0.015g/L的复硝酚钠的LB培养基。

7.一种含有粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44-60的试剂盒，所述试剂盒用于检测嗜吞噬细胞无形体抗体，其特征在于：包括权利要求1所述的粒细胞无形体病检测用重组抗原蛋白rP44-60。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括：样品垫，结合垫，吸收垫，硝酸纤维素膜，胶体金探针，鼠IgG和羊抗鼠IgG；所述样品垫和结合垫材质为玻璃纤维，所述吸收垫材质为吸水滤纸。