[发明专利]一种CD3+TCRVα7.2+T细胞培养基和扩增培养方法

权利要求书

1.一种CD3+TCRVα7.2+T细胞扩增培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、细胞采集；

S2、采用方法a或方法b进行CD3+TCRVα7.2+T细胞的分离；所述方法a：采用CD3磁珠分选出CD3+T细胞，再用抗人TCRVα7.2抗体和抗PE/APC/FITC磁珠分选得到CD3+TCRVα7.2+T细胞；所述方法b：采用流式细胞分选技术；

S3、采用方法c、方法d或方法e进行CD3+TCRVα7.2+T细胞的激活；所述方法c：采用rhuCD3抗体和rhuCD28抗体激活；所述方法d：采用MAIT细胞特异性抗原的前体5-A-RU和rhuCD28抗体激活；所述方法e：采用rhuCD28抗体激活；

S4、CD3+TCRVα7.2+T细胞的扩增培养：采用CD3+TCRVα7.2+T细胞培养基进行CD3+TCRVα7.2+T细胞扩增培养；所述CD3+TCRVα7.2+T细胞培养基为基础培养基中含有5～10％的FBS、1％100X青霉素-链霉素、1％L-谷氨酰胺、1％非必需氨基酸、20～50U/mL的IL-2、20～50ng/mL的IL-15；所述基础培养基为T009培养基；

所述步骤S4具体为：所述步骤S3激活后的细胞用所述CD3+TCRVα7.2+T细胞培养基在37℃5％CO₂的培养箱中孵育；在第1,5,10,15天加入5～50nM的5-A-RU/MGO混合物；每12～72小时，去上清，加入新鲜的所述CD3+TCRVα7.2+T细胞培养基。

2.如权利要求1所述的CD3+TCRVα7.2+T细胞扩增培养方法，其特征在于，所述步骤S1为从细胞培养物、从个体受试者外周血、脐带血或血库的血液样品进行细胞采集。

3.如权利要求1所述的CD3+TCRVα7.2+T细胞扩增培养方法，其特征在于，所述步骤S2中的方法b的流式细胞分选技术中采用抗人CD3抗体、抗人TCRVα7.2抗体和抗人CD161抗体。

4.如权利要求1所述的CD3+TCRVα7.2+T细胞扩增培养方法，其特征在于，所述方法b流式细胞分选技术时采用T009培养基培养待分选的细胞。

5.如权利要求1所述的CD3+TCRVα7.2+T细胞扩增培养方法，其特征在于，所述步骤S3的方法d中MAIT细胞特异性抗原的前体5-A-RU溶于甲基乙二醛、PBS或无菌水中。