[发明专利]壳聚糖-聚二甲双胍在作为基因转染试剂方面的应用在审
| 申请号： | 202111421710.8 | 申请日： | 2021-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN113930454A | 公开（公告）日： | 2022-01-14 |
| 发明（设计）人： | 杨欢;王洲;汪洋;王国华;姜正林 | 申请（专利权）人： | 南通大学 |
| 主分类号： | C12N15/87 | 分类号： | C12N15/87;C08G65/48 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 曹振中 |
| 地址： | 226001 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 聚糖 二甲双胍 作为 基因 转染 试剂 方面 应用 | ||
1.壳聚糖-聚二甲双胍(CS-PolyMet)在作为基因转染试剂方面的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，壳聚糖-聚二甲双胍可使细胞周期同步至G2/M期，实现高效的细胞转染。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，具体包括以下过程：
S1、试剂的预混：CS-PolyMet溶液和pDNA溶液等体积混合；CS-PolyMet与DNA/RNA的质量比为10:1，涡旋3s，37℃温育30min；制备得到待转染的复合物CS-PolyMet/pDNA；
S2、转染DNA/RNA至细胞：贴壁细胞以一定密度接种至6孔板，培养24h，换用无血清培养基，每孔分别加入CS-PolyMet/pDNA(含2μg pDNA)，培养24h。
4.一种基因转染试剂，其特征在于，采用壳聚糖-聚二甲双胍。
5.根据权利要求1所述的一种基因转染试剂，其特征在于，所述基因转染试剂通过聚合物所携带的正电荷负载基因并穿膜，通过二甲双胍的活性作用使细胞周期同步至G2/M期，一步实现高效的基因转染。
6.根据权利要求1所述的一种基因转染试剂，其特征在于，所述基因转染试剂还可添加医学上可接受的辅助试剂。
7.壳聚糖-聚二甲双胍的制备方法，其特征在于，包括以下过程：称取0.5g壳聚糖(Chitosan，CS)，壳聚糖的分子量为：50-190kDa，加20mL水，搅拌至充分溶胀，加入2M盐酸1mL，继续搅拌至壳聚糖完全溶解，放入100℃油浴中，搅拌条件下分批加入0.5g双氰胺，回流反应24h，反应完毕后纯水透析3天(MWCO：14kDa)，冷冻干燥，得白色絮状的CS-PolyMet粉末，易溶于水，粉末可4℃保存。
8.根据权利要求4所述的壳聚糖-聚二甲双胍的制备方法，其特征在于，所述壳聚糖-聚二甲双胍的合成路线如下：
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