[发明专利]一种CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点及其应用有效
| 申请号： | 202111415460.7 | 申请日： | 2021-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN114058625B | 公开（公告）日： | 2022-07-15 |
| 发明（设计）人： | 陈蕴;金坚;瞿丽丽;丁学峰;李华钟;蔡燕飞;杨兆琪;朱景宇;鲁晨;刘辰 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/85;C12N15/90;C12N15/113;C12N9/22;C12N5/10 |
| 代理公司： | 苏州市中南伟业知识产权代理事务所(普通合伙) 32257 | 代理人： | 王玉仙 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 cho 细胞 基因 nw_003613781 稳定 表达 蛋白质 及其 应用 | ||
1.一种CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点在CHO细胞稳定表达外源蛋白质或多肽中的应用，其特征在于，所述的应用是将外源蛋白质或多肽的编码基因整合在所述的CHO细胞基因NW_003613781.1内稳定表达蛋白质的位点上；所述的稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_003613781.1的第1497087-1497287碱基内。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的稳定表达蛋白质的位点可被CRISPR/Cas9技术以5' NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGG 3'作为靶序列识别。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的蛋白质为分子量小于160KDa的蛋白质。
4.一种用于在CHO细胞中表达蛋白质的表达载体，其特征在于，所述的蛋白质的编码基因位于所述的表达载体上5’同源臂 和3’同源臂中间的区域，所述的5’同源臂 和3’同源臂分别为稳定表达蛋白质的位点上下游长度为600bp的序列；所述的稳定表达蛋白质的位点位于CHO细胞基因NW_003613781.1的第1497087-1497287碱基内。
5.根据权利要求4所述的表达载体，其特征在于，所述的表达载体上还包括位于所述的蛋白质的编码基因上游的启动子序列，所述的启动子控制所述的蛋白质的表达。
6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述的启动子为：人类巨细胞病毒来源的强哺乳动物表达启动子、人延长因子1α来源的强哺乳动物表达启动子、猿猴空泡病毒40来源的哺乳动物表达启动子、磷酸甘油酸酯激酶基因来源的哺乳动物启动子、人类泛素C基因来源的哺乳动物启动子、β-肌动蛋白基因来源的哺乳动物启动子、强杂交哺乳动物启动子中的一种。
7.一种定点整合表达蛋白质的CHO重组细胞，其特征在于，所述的CHO重组细胞通过将权利要求4所述的用于在CHO细胞中表达蛋白质的表达载体、靶序列对应的sgRNA质粒以及Cas9质粒转入CHO细胞得到。
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