[发明专利]一种高通量快速检测沙门氏菌毒力的秀丽隐杆线虫感染模型及制备方法与应用

权利要求书

1.一种高通量快速检测沙门氏菌毒力的秀丽隐杆线虫感染模型，其特征在于，所述秀丽隐杆线虫为sek-1、glp-1基因缺陷型秀丽隐杆线虫；所述沙门氏菌感染秀丽隐杆线虫的培养基为S-medium缓冲液，pH为7.0±0.2；所述沙门氏菌的感染浓度为10⁷-10¹¹CFU/mL。

2.如权利要求1所述的模型在筛选抗沙门氏菌药物中的应用。

3.如权利要求1所述的模型的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)沙门氏菌的培养及菌液的制备；

(2)秀丽隐杆线虫的同期化培养，得到L4期线虫；

(3)将步骤(2)得到的L4期线虫在含有步骤(1)得到的沙门氏菌菌液中共同培养2-4天即可。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述菌液的制备包括以下步骤：

将沙门氏菌接种于麦康凯固体培养基中进行复苏、纯化，然后挑取单菌落接种到LB液体培养基中培养，获取培养液；

将所得培养基离心，弃去上清液，再用S-medium缓冲液冲洗，然后再将菌液浓度调整到10⁷-10¹¹CFU/mL，获取不同浓度的菌液。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述单菌落在LB培养基中的培养条件为100-135r/min震荡培养16-18h。

6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)的具体步骤包括：

S1：将含有秀丽隐杆线虫的冻存管速融后，离心，弃去上清液，将线虫倒入NGM平板中，以使秀丽隐杆线虫复苏；

S2：选择含有大量线虫及虫卵的NGM平板，用M9缓冲液反复冲洗并收集冲洗液，经裂解、离心、沉淀后，转移到含有大肠杆菌OP50的NGM板上，置于20℃生化培养箱，40h后线虫即生长到L4期，备用。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，S1中速融温度为37℃，离心条件为3000r/min离心1min。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，S2中裂解时间为4min，裂解、离心后含虫卵的沉淀用S基本液重悬后，置于20℃、100-135r/min条件下震荡培养12-18h；之后再于3000rpm离心1min，将沉淀转移至含有OP50的NGM板上。

9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中还包括以下步骤：

将L4期线虫加到沙门氏菌菌液后，调节pH值为7.0±0.2，并于25℃培养。

10.一种如权利要求3-9任一项所述的制备方法在筛选药物中的应用，其特征在于，用于筛选在缺陷型秀丽隐杆线虫体内对沙门氏菌有抑制作用的药物。