[发明专利]骆驼凝乳酶原突变蛋白及其编码基因和应用

权利要求书

1. 骆驼凝乳酶原突变蛋白，其特征在于，所述骆驼凝乳酶原突变蛋白选自以下（1）-（4）中的任何一种突变蛋白：（1）将野生型骆驼凝乳酶原的前导肽区域的第34位丙氨酸突变为天冬酰胺后得到的突变蛋白；（2）将野生型骆驼凝乳酶原的前导肽区域的第35位缬氨酸突变为天冬酰胺后得到的突变蛋白；（3）将野生型骆驼凝乳酶原的前导肽区域的第38位赖氨酸突变为天冬酰胺后得到的突变蛋白；（4）将野生型骆驼凝乳酶原的前导肽区域的第39位酪氨酸突变为天冬酰胺后得到的突变蛋白；所述突变蛋白的氨基酸序列分别为SEQ IDNo.1-4所示。

2.权利要求1所述的骆驼凝乳酶原突变蛋白的编码基因。

3.根据权利要求2所述的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列分别为SEQ ID NO.5-8所示。

4.含有权利要求2所述编码基因的重组表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体是重组毕赤酵母表达载体，其构建方法包括：将凝乳酶原突变蛋白的编码基因可操作的与毕赤酵母表达载体pPIC9K相连接，获得重组毕赤酵母表达载体；其中，将凝乳酶原突变蛋白的编码基因的5’端添加His-Tag，然后通过KEX2与α因子信号肽连接得到融合基因，将该融合基因位于乙醇氧化酶1启动子和终止子之间。

6.含有权利要求4或5所述重组表达载体的宿主细胞；其中，所述的宿主细胞是毕赤酵母细胞。

7.权利要求2所述的编码基因在制备骆驼凝乳酶中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，包括：将权利要求2所述的编码基因可操作的与表达载体相连接得到重组表达载体；将所述重组表达载体转化宿主细胞，得到重组菌株；培养重组菌株，诱导重组骆驼凝乳酶的表达，回收并纯化所表达的重组骆驼凝乳酶；其中，所述的宿主细胞是毕赤酵母细胞。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述的重组表达载体为重组毕赤酵母表达载体。