[发明专利]一种与肿瘤化疗药物基因检测相关的引物组合物及试剂盒

说明书

本发明公开了一种肿瘤化疗药物基因检测引物组合物、试剂盒及其检测方法，本试剂盒针对肿瘤化疗药物个体化基因，包括ABCB1、ATIC、CBR3、CDA、DPYD、ERCC1、GSTP1、MTHFR、MTRR、NQO1、SOD2、TP53、UGT1A1、UMPS、XPC、XRCC1，共22对引物或包含其中部分引物的组合，每对引物的正向引物与反向引物均包括扩增引物对，以及与所述扩增引物对5’端连接的其他序列。每对所述引物的正向引物与反向引物中的特异性序列选自SEQ ID NO.1‑44所示的序列，并提供了肿瘤化疗药个体化基因检测试剂盒。本发明的试剂盒和特异性引物组能够快速、准确、一次性检测肿瘤化疗药个体化突变基因热点区域，可检测血液等样本，能够很好地用于指导化疗用药，选择化疗方案。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种与肿瘤化疗药物基因检测相关的引物组合物及试剂盒。

背景技术

药物效应存在个体化差异，其影响因素包括生理性因素，病理性因素、环境因素和遗传因素，其中遗传因素主要取决个体基因多态性，包括单核苷酸多态性和拷贝数多态性，这些多态性会通过药物代谢酶、药物转运蛋白、药物受体、致病基因等方面影响药代动力学和药效动力学，进而导致药物疗效和毒性的个体化差异。

化疗是肿瘤治疗的常用手段，但是化疗患者仍会出现化疗效果不佳或毒副作用较大的情况，对于肿瘤治疗后复发或转移的患者，还会存在原有化疗方案无效的情况，如果能对化疗患者进行化疗药个体化基因的检测，从而针对性的提供化疗个体化方案，对于减少患者治疗负担，提高化疗的有效性非常有益。

下一代测序技术(Next-Generation Sequencing，NGS)，又称二代测序技术，是近年来兴起的可以一次对数十万乃至数亿条DNA分子进行测序的高通量检测技术，目前已广泛地应用于产前检测，肿瘤突变分析和用药指导，病原体微生物筛查等领域。Illumina平台是目前国内最常用的NGS测序仪，市场占有率较高。国产的MGI平台也各自具有独特的优点，国内的应用比率也在稳步增长中。

进行NGS测序前，通常需要先对样本DNA的特定区域进行富集和扩增，这个过程称为文库构建。多重PCR技术无需对样本进行预处理，较少量的样本或者一定程度降解的样本也可使用，适合临床上绝大部分情况；同时建库流程简单，数小时即可完成，总体成本也较低。但多重PCR技术对扩增引物池的设计提出了较高的要求，稍有差错就容易产生大量引物二聚体导致目的片段急剧减少，或者不得不分管操作，削弱了原本具有的优势。

发明内容

本发明的目的在于提供肿瘤化疗药物个体化基因，包括ABCB1、ATIC、CBR3、CDA、DPYD、ERCC1、GSTP1、MTHFR、MTRR、NQO1、SOD2、TP53、UGT1A1、UMPS、XPC、XRCC1，包括22对引物或包含其中部分引物的组合，每对引物的正向引物与反向引物均包括扩增引物对，以及与所述扩增引物对5’端连接的其他序列。本发明引物组合物中各引物的结构示意图如图1。

本发明提供一种检测肿瘤化疗药物基因的试剂盒，本试剂盒包括肿瘤化疗药物基因的特异性引物，还包括DNA聚合酶、PCR缓冲液、dNTP等。本试剂盒组成详见表1。

表1试剂盒组成