[发明专利]一种抗生素残留检测方法及其检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种抗生素残留检测方法及其检测试剂盒，属于分析检测领域。本发明的探针组包括靶标抗生素的核酸适配体、DNA1、探针H1、探针H2、Enzyme strand和Substrate strand。该探针组可以特异性识别靶标抗生素，结合发夹探针、外切酶III(Exo III)、Mg²⁺依赖性DNAzyme实现对靶标抗生素的高灵敏检测，对靶标抗生素的检测线性范围为10fM‑10nM，检出限为10fM，具有灵敏度高，特异性好，准确度高，重复性好的特点。

技术领域

本发明涉及分析检测领域，特别涉及一种抗生素残留检测方法及其检测试剂盒。

背景技术

卡那霉素(Kan)是一种氨基糖苷类抗生素，广泛运用于微生物引发的感染。由于Kan的滥用，食品中过量的Kan残留已经成为对公众健康的威胁。

常规的Kan检测方法有高效液相色谱(HPLC)、高效毛细管电泳(HPCE)和酶联免疫吸附法(ELISA)。虽然这些方法灵敏度高、准确度高，但大多数都需要昂贵的设备、复杂的预处理和高技能的人员，这限制了这些方法在Kan检测分析中的应用。

因此，迫切需要开发高灵敏度、高选择性的Kan检测方法，使检测过程简单、快速，降低成本，易于推广。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一组检测抗生素的探针组以及基于其构建的检测试剂盒，其检测耗时短、操作简单，且灵敏度高，易于大规模推广使用。

本发明的第一个方面，提供一组检测抗生素的探针组，包括靶标抗生素的核酸适配体、DNA1、探针H1、探针H2、Enzyme strand和Substrate strand；

所述DNA1与所述靶标抗生素的核酸适配体的互补碱基数少于所述靶标抗生素与所述核酸适配体的互补碱基数；

所述DNA1与所述探针H1的3'突出端互补；

所述DNA1与所述探针H2的3'突出端互补；

所述Enzyme strand为Mg²⁺依赖性DNAzyme的酶链；

所述Enzyme strand从5'到3'依次包括：5*序列、8序列和7*序列；

所述Substrate strand为Mg²⁺依赖性DNAzyme的底物链；

所述Substrate strand从5'到3'依次包括：6*序列、Mg²⁺依赖性DNAzyme的识别位点rA和4*序列；

所述4*序列、5*序列与所述探针H1的5'端互补杂交形成Y型DNA双链结构；

所述6*序列、7*序列与所述探针H2的5'端互补杂交形成Y型DNA双链结构；

所述rA的两端分别修饰有荧光基团和淬灭基团。

在本发明的一些优选的实施方式中，所述DNA1从5'到3'依次包括：3序列、2序列和1序列；所述3序列、2序列和1序列组成的序列与所述核酸适配体互补。

在本发明的一些优选的实施方式中，所述探针H1从5'到3'依次包括：4序列、5序列、5*序列、4*序列、1*序列和2*序列；所述4序列与所述4*序列互补；所述5序列与所述5*序列互补；所述1*序列与所述1序列互补；所述2*序列与所述2序列互补。

在本发明的一些优选的实施方式中，所述探针H2从5'到3'依次包括：7序列、6序列、6*序列、7*序列、2*序列和3*序列；所述7序列与所述7*序列互补；所述6序列与所述6*序列互补；所述3*序列与所述3序列互补。