[发明专利]一种反相色谱固定相及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种反相色谱固定相及其制备方法和应用，涉及液相色谱固定相技术领域，反相色谱固定相的结构式为：其中Silica Gel为硅胶，n＝0～10。所述反相色谱固定相的制备方法，通过巯基‑烯烃点击反应将截短侧耳素修饰到硅胶表面，制备得到新型反相色谱固定相。所述反相色谱固定相的能够应用于分离非极性化合物等物质。本发明提供的反相色谱固定相的结构新颖，制备方法简单高效，固定相中含水疏水骨架，同时多种官能团如酯基、羰基、羟基和硫醚键可提供不同的分离选择性，可广泛用于各类化合物的分离分析。

技术领域

本发明涉及液相色谱固定相技术领域，具体说是一种使用二萜化合物截短侧耳素在硅胶表面进行修饰的反相色谱固定相及其制备方法和应用。

背景技术

反相色谱是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质的极性差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。反相色谱具有柱效高、分离能力强、保留机理清楚等优点，是液相色谱分离模式中使用最为广泛的一种，广泛应用于生物大分子、蛋白质及酶等样品的分离分析。

反相固定相中最具代表性的是以硅胶为载体，通过表面键合非极性分子层制备，获得性能稳定的反相填料。在硅胶基质的反相填料中，常规的C8、C18、苯基、五氟苯基键合基团最为常见。Matysova等报道了利用苯己基固定相对驱虫剂中双羟萘酸噻嘧啶、奥芬达唑、芬苯达唑、丁基羟基茴香醚具有良好的分离效果。但是目前常用种类的固定相并不能满足所有样品的分离需求，因此需要开发新型结构的反相固定相来提升不同样品之间分离选择性。

发明内容

本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种反相色谱固定相及其制备方法，该键合相含有二萜化合物截短侧耳素结构，其制备方法简单，适用性广泛。

本发明的技术解决方案如下：

本发明第一方面提供了一种反相色谱固定相，其结构式如下：

其中Silica Gel为硅胶，n＝0～10。

本发明第二方面一种反相色谱固定相的制备方法，包括以下步骤：

a、硅胶预处理：硅胶加入浓度为20～40wt％的强酸溶液中，加热回流搅拌1～48小时，过滤，用水洗涤至pH＝6～7，所得固体于干燥箱中100～160℃条件下干燥8～24小时，得酸化后硅胶；

b、巯基中间体合成：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂中加入巯基硅烷偶联剂和酸化后硅胶，在20～130℃下反应1～48小时，过滤，依次用甲醇、四氢呋喃、甲醇进行洗涤，所得固体于干燥箱中40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到巯基中间体；

c、巯基-烯烃点击反应：在氮气或氩气保护下，在有机溶剂/水混合溶液中加入截短侧耳素、自由基引发剂和巯基中间体，在40～80℃下反应8～48小时，过滤，依次用水、甲醇、水、甲醇洗涤，所得固体于干燥箱中40～80℃条件下真空干燥8～24小时，得到色谱固定相。

本发明的一种具体实施方式，步骤a所用的强酸溶液为盐酸、硝酸、硫酸中的一种；以每克硅胶计，强酸溶液的用量为2～20mL。

本发明的一种具体实施方式，步骤b所用的巯基硅烷偶联剂有如下结构：

其中，X为氯、甲氧基或乙氧基中的一种，n＝0～10；

以每克硅胶计，巯基硅烷偶联剂的用量为1～10mmol。

本发明的一种具体实施方式，步骤b所用的有机溶剂为二氯甲烷、甲苯、二甲苯、二甲亚砜、N,N～二甲基甲酰胺中的一种；以每克硅胶计，有机溶剂的用量为5～15mL。

本发明的一种具体实施方式，步骤c所用的有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、二甲亚砜、N,N～二甲基甲酰胺中的一种。