[发明专利]检测恩镰孢菌素化学发光试剂盒及其应用

说明书

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种检测恩镰孢菌素的化学发光试剂盒及其应用。本发明公开了一种检测恩镰孢菌素的化学发光试剂盒，包括清洗液，还包括以下试剂：恩镰孢菌素校准品、恩镰孢菌素衍生物磁珠连接物、酶结合物、化学发光底物。本发明还同时提供了上述检测恩镰孢菌素的化学发光试剂盒的应用：用于检测样本中的四种恩镰孢菌素的总量。四种恩镰孢菌素为：恩镰孢菌素A(ENA)、恩镰孢菌素A1(ENA1)、恩镰孢菌素B(ENB)、恩镰孢菌素B1(ENB1)。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及一种检测恩镰孢菌素的化学发光试剂盒及其应用。

背景技术

恩镰孢菌素(Enniatins,ENNs)主要是由镰刀菌的某些菌种侵染小麦、大麦、黑麦和燕麦等谷物后，在潮湿和低温条件下产生的真菌毒素。ENNs是一类结构相似的真菌毒素，首先在尖孢镰刀菌(F.oxysporum)中发现，随后在锐顶镰刀菌(F.acuminatum)、燕麦镰刀菌(F.avenaceum)和木贼镰刀菌(F.equiseti)中发现。到目前为止，一经发现20多种ENNs的类似物，但仅4种ENNs[恩镰孢菌素A(ENA)、恩镰孢菌素A1(ENA1)、恩镰孢菌素B(ENB)、恩镰孢菌素B1(ENB1)]常在食品和饲料中检测到。

ENNs为典型的环状六酯肽类化合物，含有可变的羟基酸残基和N-甲基氨基酸残基。ENNs在N-甲基氨基酸残基上具有不同的脂肪族氨基酸残基。这些残基通过肽键或者分子内脂键链接形成六元环状缩酯肽结构。四种ENNs的化学性质见表1。

表1、恩镰孢菌素的化学性质

恩镰孢菌素ENNs的主要毒性作用与他们的离子载体抑制特性相关。ENNs能提高阳离子穿过细胞膜的能力，有次干扰正常生理水平下细胞的阳离子水平、影响细胞膜的电化学梯度，而产生毒性反应，如细胞内钙离子浓度增加后，激活了钙依赖的内切酶活性而出现典型的凋亡特征。国内相关恩镰孢菌素ENNs毒性的研究较少，据国外同类研究结果表明，在ENNs的作用下，人结肠癌细胞Caco-2内出现活性氧浓度上升和通过降低线粒体膜电位诱导线粒体依赖的细胞凋亡现象。

恩镰孢菌素ENNs在不同国家的污染情况。恩镰孢菌素在不同的国家都发现谷物中有污染的情况。UHLIG调查了2000-2002年挪威产的73份燕麦、75份大麦和80份小麦共计228份样品中的4中恩镰孢菌素ENNS的污染状况；结果发现恩镰孢菌素B(ENB)检出率为100％(228/228)，ENB1检出率94％(214/228)，ENA1检出率67％(153/228)，ENA检出率25％(58/228)。SORENSEN等在2005-2006年丹麦收获的80份玉米和玉米青储饲料中检出了恩镰孢菌素ENNs，其中ENB检出率89％最高含量988ug/kg。除此之外，在突尼斯、意大利、摩洛哥、西班牙等地的小麦、玉米、大米样本中均检出了恩镰孢菌素ENNs。YOSHINARI在日本市场上抽检了163份小麦样本，检测发现61％的进口小麦粉和58％的的日本国产小麦粉存在呕吐毒素DON和恩镰孢菌素的协同污染。

韩小敏等从北京、安徽、宁夏等省市采集市售玉米及其制品、小麦及其制品检测其中的恩镰孢菌素发现，19份玉米及其制品中均检出恩镰孢菌素ENA,ENA1和ENB1，平均含量分别为0.06ug/kg，0.21ug/kg和0.09ug/kg。17份小麦及其制品中均检出4中ENNs，含量分别为ENA3.57，ENA10.89，ENB14.13和ENB1 15.10ug/kg。其中一份来自宁夏小麦样品中ENB和ENB1的含量高达111.95和71.66ug/kg。