[发明专利]一种mSEB抗原蛋白的纯化方法

说明书

本发明公开了一种mSEB抗原蛋白的纯化方法，解决了现有技术中mSEB蛋白纯化工艺获得的mSEB蛋白原液纯度不高，且存放稳定性差，会出现纯度下降的情况的技术问题。它包括下述步骤：S1、菌体破碎；S2、澄清过滤；S3、SPFF柱层析；S4、SPHP柱层析；S5、Phenyl HP柱层析；S6、G25柱层析；S7、Q HP柱层析；S8、原液制备。本发明纯化方法获得的mSEB蛋白原液纯度高，且存放稳定性好，不会出现纯度下降的情况。

技术领域

本发明涉及蛋白纯化领域，具体涉及一种mSEB抗原蛋白的纯化方法。

背景技术

金葡菌是引起医院感染和社区感染的一种重要致病菌，呈多重耐药性发展而成为临床上治疗的难点，急需研制疫苗控制其感染与流行。

金葡菌有“嗜肉菌的别称，作为革兰氏阳性菌的代表，是引起医院感染和社区感染的一种重要致病菌。感染以急性、化脓性为特征，局部可引起皮肤和软组织等的化脓性感染，经久不愈；全身可导致急性肺炎、脓毒血症、心内膜炎、脓毒性关节炎、骨髓炎等严重感染及并发症，死亡率高达20％。同时，金葡菌的外毒素还可引起食物中毒、烫伤样皮肤综合征和中毒性休克综合征等全身致死性感染。

随着抗生素长期、广泛地使用，细菌耐药性问题日益突出，作为典型代表的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA） 自1961年被首次发现至今，目前已成为全球ICU病房、术后感染、烧伤、战创伤等感染率最高的院內感染病原菌之一。同时，因其致病性强、传播途径广泛、易暴发流行，呈多重耐药性发展而成为临床上治疗的难点，被称为“第一超级细菌”。

MRSA分为医院获得性MRSA（healthcare-associated MRSA，HA-MRSA）及社区获得性MRSA（community-associated MRSA，CA-MRSA）。

2009年，据美国CDC在《新英格兰医学杂志》报道，美国每年MRSA严重感染人数约为9万人，致死病例约为2万人。2010年12月中国“MRSA院内感染诊治策略新进展”会议资料显示，我国内地医院院内MRSA感染发生率约为8%，每例院内感染患者平均住院时间延长14天，花费增加6542元，全国每年因医院感染造成的直接损失超过150亿元。同时，由于抗生素的滥用，临床高度耐药性金葡菌，尤其是MRSA 的分离检出率逐年上升。中国2011年全国细菌耐药监测报告显示，在全国129家三甲医院被检的273808株细菌中，金葡菌位列临床革兰阳性菌分离量首位，MRSA检出率占被检出金葡菌的60%，广泛耐药率超过40%。基于这种严峻形势，我国已将MRSA 列为21世纪可能对国人卫生健康有重大影响的12种病原微生物之一。当前MRSA已与乙型肝炎、AIDS 被列为世界三大最难解決的感染性疾病，并位居首位。目前，万古霉素是治疗MRSA感染的最后一道防线，但随着2002年耐万古霉素金黄色葡萄球菌（vancomycin-resistant staphylococcus aureus，VRSA）的相继出现，高度耐药性发展的MRSA和VRSA在全球呈蔓延趋势，使得临床金葡菌的感染面临“无药可治”的严峻挑战。

抗生素的研发速度远远跟不上细菌耐药性的发展速度，而安全有效的金葡菌疫苗将可成为预防金葡菌感染的有效手段。WHO于2011年提出了“抵抗耐药菌”的“六点政策一揽子计划”，并强调在未来重点支持创新性疫苗等免疫防控制品的研发。因此，加强对金葡菌感染的免疫防治研究，研制安全、有效的新型金葡菌疫苗将对有效控制金葡菌广泛感染及大规模爆发流行、大幅降低金葡菌院内感染的发病率及耐药性蔓延等方面具有重要的现实及战略意义。

金葡菌疫苗mSEB抗原蛋白概述：

SEB是超抗原外毒素，通常由致病性金葡菌特别是MRSA 产生，是引起人类脓毒症休克、全身炎症反应、食物中毒的主要原因。由于SEB是超抗原，不受MHC分子限制，在不依赖抗原识别的情况下直接结合T细胞抗原表位，从而激活T细胞，促使T 细胞大量释放细胞因子而引起毒素休克综合征等临床症状。