[发明专利]一种人精子膜蛋白SPAG8特异性多肽与抗体的制备方法

权利要求书

1.一种人精子膜蛋白SPAG8特异性多肽，其特征在于抗原结合位点广泛分布于人精子颈部、尾部中段及尾部外膜，多肽的氨基酸序列为：GVSNIRTLDTPFRKNC。

2.一种抗人精子膜蛋白SPAG8的抗体制备方法，其特征在于包括：

1)、人精子膜蛋白SPAG8特异性抗原表位的分析与设计；

2)、人精子膜蛋白SPAG8特异性多肽抗原合成与载体蛋白偶联纯化；

3)、制备人工免疫原免疫动物；

4)、收集抗体血清；

5)、饱和硫酸铵法分离纯化抗人精子膜蛋白SPAG8IgG抗体；

6)、酶联免疫吸附实验鉴定血清抗体与天然人SPAG8蛋白结合效价；

7)、细胞免疫荧光染色定位精子表面SPAG8蛋白分布。

3.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于特异性抗原表位的分析与设计所确定的胞外特异性抗原表位序列为人精子膜蛋白SPAG8氨基酸序列中第422位到第437位氨基酸的肽段。

4.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于载体蛋白为匙孔血蓝蛋白(KLH)。

5.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于人工免疫原为KLH-多肽与完全或不完全福氏佐剂混合免疫动物。

6.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于载体蛋白偶联纯化为合成抗原多肽通过交联剂将多肽氨基酸疏基与载体蛋白氨基共价交联，经层析柱提纯。

7.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于免疫动物为在实验动物背部通过多点皮下注射，并经二次以上加强免疫，与人精子膜蛋白提取物反应血清效价大于1：3200。

8.根据权利要求2所述的抗体制备方法，其特征在于分离纯化抗体是经过硫酸铵沉淀、蛋白亲和纯化能够从抗体血清中获得高纯度的IgG抗体。