[发明专利]术后腔内化疗/免疫协同治疗的缓释凝胶递药系统及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种化疗/免疫协同治疗胶质瘤术后的缓释递药体系，其特征在于：由温度敏感的凝胶材料作为骨架嵌入PTX前药靶向纳米粒以及CpG靶向聚合物纳米粒制成的递药体系；其中，温度敏感的凝胶材料为聚（乳酸-羟基乙酸）-聚（乙二醇）-聚（乳酸-乙醇酸）三嵌段共聚物；上述PTX前药靶向纳米粒的具体制备步骤是将Pep-PEG₂₀₀₀-DSPE溶于水中，并与自组装PTX前药纳米粒混合，得到PTX前药靶向纳米粒；靶向肽Pep-PEG₂₀₀₀-DSPE与自组装PTX前药纳米粒的质量比为1:5~10；所述的自组装PTX前药纳米粒是利用二硫代甘醇酸将PTX与十八醇化学键合，得到PTX前药分子PTX-SS-C18，前药分子自组装形成PTX前药纳米粒；其中，PTX-SS-C18制备方法包括以下步骤：将1.0g二硫代甘醇酸与15mL无水乙酸酐混合，在氮气保护下，35˚C搅拌反应3h后，旋转蒸发去除乙酸和多余的乙酸酐，旋蒸后的产物溶于二氯甲烷，并加入1.49g的十八醇和65mg的DMAP，室温下搅拌反应15 h后用1% HAc终止，有机层用无水硫酸钠干燥；粗产物经硅胶柱层析纯化后得到中间体HOOC-CH₂-SS-CH₂-COOC₁₈；将中间体和HBTU在冰浴下溶于二氯甲烷，并逐滴加入N, N-二异丙基乙胺，反应30 min后加入200mgPTX，在避光条件下，继续室温反应10 h；待反应完全后，混合物先后用1% HAc和纯水洗涤，并用无水硫酸钠干燥；粗产物经硅胶柱层析纯化，干燥后得到PTX-SS-C18；所述的CpG靶向聚合物纳米粒是由水相与油相通过复乳法制备；所述的水相由CpG溶于纯净水中得到；所述的油相由PLGA₂₀₀₀₀和甘露糖化PLGA₃₀₀₀₀聚合物、阳离子脂质DC-Chol溶于二氯甲烷中得到；所述的油相中PLGA₂₀₀₀₀和阳离子脂质DC-Chol的质量比为45：2，Man-PLGA和阳离子脂质DC-Chol的质量比为5：2。

2.根据权利要求1所述的化疗/免疫协同治疗胶质瘤术后的缓释递药体系，其特征在于：所述聚（乳酸-羟基乙酸）-聚（乙二醇）-聚（乳酸-乙醇酸）三嵌段共聚物的制备方法如下：称取一定量的聚（乳酸-羟基乙酸）-聚（乙二醇）-聚（乳酸-乙醇酸）三嵌段共聚物，均匀分散在蒸馏水中，在室温放置24 h，使其充分溶胀得到浓度为10-30%（w/v）凝胶水溶液。

3.根据权利要求1所述的化疗/免疫协同治疗胶质瘤术后的缓释递药体系，其特征在于：所述的自组装PTX前药纳米粒的制备具体包括以下步骤：称取5 mg PTX前药分子PTX-SS-C18溶于0.5 mL无水乙醇得有机相，室温下用微量注射器将有机相缓慢滴入到不断搅拌的10 mL纯水中，滴加完毕后继续敞口搅拌5 min，60℃旋转蒸发5 min除去残余有机溶剂，最后经0.45 μm，0.22 μm微孔滤膜过滤得到。

4.根据权利要求1所述的化疗/免疫协同治疗胶质瘤术后的缓释递药体系，其特征在于：所述CpG靶向纳米粒制备方法包括以下步骤：将0.5 mg CpG溶于50 μL纯净水中得水相，取22.5 mg PLGA₂₀₀₀₀和2.5 mg Man-PLGA₃₀₀₀₀与阳离子脂质DC-Chol 1 mg溶于0.5 mL二氯甲烷中得油相，将油相与水相混合，冰浴下用超声波细胞粉碎仪超声形成初乳，将初乳加入到1.5 mL 1%的PVA水溶液中，冰浴下超声得到复乳（w/o/w），分散到25 mL 0.3%的PVA水溶液中，在室温下敞口搅拌蒸发除去有机溶剂，所得溶液高速冷冻离心，弃上清，水洗后即得MNP_CpG。

5.一种权利要求1所述的化疗/免疫协同治疗胶质瘤术后的缓释递药体系的制备方法，其特征在于以PTX前药靶向纳米粒和CpG靶向聚合物纳米粒为活性成分，将其分散在温度敏感的原位凝胶骨架内；其中，温度敏感的凝胶材料为聚（乳酸-羟基乙酸）-聚（乙二醇）-聚（乳酸-乙醇酸）三嵌段共聚物。