[发明专利]用于预防禽安卡拉病的重组蛋白及构建方法和应用

说明书

本发明涉及一种用于预防禽安卡拉病的重组蛋白及构建方法和应用，属于基因工程生物医药技术领域。分别构建并化学合成4型禽腺病毒四种结构蛋白的多抗原表位串联蛋白的编码DNA，再将这四种多抗原表位串联蛋白的编码DNA连接，获得编码多联融合重组蛋白的基因，构建用于大肠杆菌原核表达系统的重组表达质粒，并转入大肠杆菌感受态细胞，获得大肠杆菌基因工程表达菌，并诱导表达和大量纯化多联融合重组蛋白，将多联融合重组蛋白与免疫佐剂混合制备禽安卡拉病多表位亚单位疫苗。本发明亚单位疫苗具有强免疫原性，能够刺激机体产生保护性抗体，且抗体维持时间长，可以有效预防禽4型腺病毒感染发病，对禽安卡拉病具有预防保护作用。

技术领域

本发明属于基因工程生物医药技术领域，具体涉及一种用于预防禽安卡拉病的多联融合重组蛋白及构建方法与应用。

背景技术

禽安卡拉病由禽安卡拉病毒引起的一种家禽疫病，该病对3-6周龄的肉鸡影响尤为显著，种鸡和蛋鸡亦可在相似年龄段发病，死亡率高达20％-80％。禽安卡拉病毒是禽腺病毒科Ⅰ亚群禽腺病毒属禽腺病毒C种血清型4型病毒(FAdV-4)。根据群特异性抗原的不同，将禽腺病毒分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三个亚群，Ⅰ亚群有A、B、C、D、E五个种，12个血清型(FAdV-1、2、3、4、5、6、7、8a、8b、9、10、11)。该群病毒在鸡、鸭、猪体内普遍存在，常呈隐性感染，作为继发病原共同作用于家禽，并能垂直传播，污染鸡胚。该病于1987年3月在巴基斯坦的安卡拉地区发现，2015年以来，在我国山东、辽宁、吉林、河北等地区暴发，给我国养禽业造成巨大的经济损失。目前，有效预防该病的疫苗较少，抗生素及抗病毒药物对该病疗效不大，没有特效药物，常造成该病防控不利。

安卡拉病毒为DNA病毒,病毒粒子无囊膜成球形，呈二十面体对称结构。粒子直径一般在70-90nm,由252个衣壳粒构成，其中12个顶角壳粒为五邻体(Penton)，240个非顶角壳粒为六邻体(Hexon)和纤突蛋白(Fiber1、Fiber2)。五邻体、六邻体、纤突蛋白是病毒的衣壳蛋白，具有免疫原性。五邻体蛋白与纤突蛋白在病毒吸附、进入细胞的过程中发挥作用，且能有效刺激机体产生体液免疫，诱导中和抗体产生。六邻体蛋白含有特异性抗原决定簇，是抗体的中和目标，与致病性关系密切。

由于禽安卡拉病发病快、死亡率高，扩散能力强，可垂直传播和水平传播，已对养禽业造成巨大危害。因此，为解决这个问题，迫切需要研制开发一种新型有效的疫苗。目前预防该病主要靠灭活苗和弱毒苗，但是这两种疫苗存在很多的缺点，存在保护效果不稳定、易引起继发感染、毒力返强等问题。

发明内容

本发明提供一种用于预防禽安卡拉病的重组蛋白及构建方法和应用，以解决目前灭活苗和弱毒苗存在的保护效果不稳定、易引起继发感染、毒力返强等问题。制备禽安卡拉病亚单位疫苗，应用于预防禽安卡拉病。

本发明采取的技术方案是：

用于预防禽安卡拉病的重组蛋白为多联融合重组蛋白FAdV4:F1-P-F2-H，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明所述重组蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明用于预防禽安卡拉病的重组蛋白的编码基因构建方法，包括下列步骤：

利用柔性Linker和限制性内切酶酶切位点连接方法，将源自4型禽腺病毒Fiber1的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:F1、源自4型禽腺病毒Penton的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:P、源自4型禽腺病毒Fiber2的多抗原表位串联蛋白的编码DNAFAdV4:F2和源自4型禽腺病毒Hexon的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:H进行串联，得所述编码基因FAdV4:F1-P-F2-H。