[发明专利]用于预防禽安卡拉病的重组蛋白及构建方法和应用

权利要求书

1.一种用于预防禽安卡拉病的重组蛋白，其特征在于：所述重组蛋白为多联融合重组蛋白FAdV4:F1-P-F2-H，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述的用于预防禽安卡拉病的重组蛋白的编码基因，其特征在于：所述重组蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.如权利要求2所述的用于预防禽安卡拉病的重组蛋白的编码基因构建方法，其特征在于，包括下列步骤：

利用柔性Linker和限制性内切酶酶切位点连接方法，将源自4型禽腺病毒Fiber1的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:F1、源自4型禽腺病毒Penton的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:P、源自4型禽腺病毒Fiber2的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:F2和源自4型禽腺病毒Hexon的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:H进行串联，得编码基因FAdV4:F1-P-F2-H。

4.根据权利要求3所述的编码基因构建方法，其特征在于：

所述源自4型禽腺病毒Fiber1的多抗原表位串联蛋白的编码DNA包括4型禽腺病毒Fiber1多个抗原表位的基因片段，以柔性linker间隔串联，化学合成所述的经密码子优化的编码DNA FAdV4:F1，如SEQ ID NO.2的1-348bp所示，对应氨基酸序列如SEQ ID NO.1的1-116aa所示；

所述源自4型禽腺病毒Penton的多抗原表位串联蛋白的编码DNA包括4型禽腺病毒Penton多个抗原表位的基因片段，以柔性linker间隔串联，化学合成所述的经密码子优化的编码DNA FAdV4:P，如SEQ ID NO.2的382-714bp所示，对应氨基酸序列如SEQ ID NO.1的128-238aa所示；

所述源自4型禽腺病毒Fiber2的多抗原表位串联蛋白的编码DNA包括4型禽腺病毒Fiber2多个抗原表位的基因片段，以柔性linker间隔串联，化学合成所述的经密码子优化的编码DNA FAdV4:F2，如SEQ ID NO.2的742-1077bp所示，对应氨基酸序列如SEQ ID NO.1的248-359aa所示；

所述源自4型禽腺病毒Hexon的多抗原表位串联蛋白的编码DNA包括4型禽腺病毒Hexon多个抗原表位的基因片段，以柔性linker间隔串联，化学合成所述的经密码子优化的编码DNA FAdV4:H，如SEQ ID NO.2的1099-1404bp所示，对应氨基酸序列如SEQ ID NO.1的367-468aa所示。

5.根据权利要求3所述的编码基因构建方法，其特征在于：所述限制性内切酶酶切位点连接方法是引入Nco I、NdeI、Hind III、XhoI、Bam HI五种限制性内切酶酶切位点到四种多抗原表位串联蛋白的编码DNA的上游引物和下游引物，包括：

源自4型禽腺病毒Fiber1的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:F1的上游引物含有NcoI限制性内切酶位点，如SEQ ID NO.3所示,下游引物含有NdeI限制性内切酶位点，如SEQID NO.4所示；

源自4型禽腺病毒Penton的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:P的上游引物依次含有NdeI、Hind III、XhoI限制性内切酶位点，如SEQ ID NO.5所示,下游引物含有Bam HI限制性内切酶位点，如SEQ ID NO.6所示；

源自4型禽腺病毒Fiber2的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:F2的上游引物依次含有NdeI、Bam HI、Hind III限制性内切酶位点，如SEQ ID NO.7所示,下游引物含有XhoI限制性内切酶位点，如SEQ ID NO.8所示；

源自4型禽腺病毒Hexon的多抗原表位串联蛋白的编码DNA FAdV4:H的上游引物依次含有NdeI、Bam HI、XhoI限制性内切酶位点，如SEQ ID NO.9所示,下游引物含有Hind III限制性内切酶位点，如SEQ ID NO.10所示。