[发明专利]一种检测滑液囊支原体抗体的包被抗原、试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测滑液囊支原体抗体的包被抗原、试剂盒及其检测方法。检测滑液囊支原体抗体的包被抗原为重组EFG蛋白；所述重组EFG蛋白的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示序列；所述重组EFG蛋白的核苷酸序列包括如SEQ ID NO：2所示序列。本发明将重组EFG蛋白作为检测滑液囊支原体抗体的ELISA方法的包被抗原，可以用于临床滑液囊支原体血清抗体检测，高效检测养殖场滑液囊支原体抗体；重组EFG蛋白作为检测滑液囊支原体抗体的ELISA方法的包被抗原，使得检测方法具有良好的反应原性、特异性、敏感性和重复性，可用于临床滑液囊支原体血清抗体检测，为滑液囊支原体疫苗免疫程序的制定提供了一定的指导，从而达到防控滑液囊支原体感染的目的。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测滑液囊支原体抗体的包被抗原、试剂盒及其检测方法。

背景技术

滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是禽类的主要致病性支原体之一，其主要感染群体为鸡或火鸡，家禽感染MS后主要表现为关节渗出性的滑液囊膜及腱鞘滑膜炎，还可引起亚临床呼吸道症状以及气囊炎。MS对各个年龄的鸡和火鸡都能感染，但雏鸡感染性最高，一旦感染便终身带菌。MS感染多为慢性或隐性感染，急性病例较少，临床上常常表现为与NDV、IBV、IBDV、大肠杆菌等病原的混合感染。MS主要通过健康鸡与发病鸡之间的接触进行水平传播，此外也还包括通过垂直传播、经蛋传播，危害极大。

目前对于MS的防控主要通过药物预防和疫苗免疫。疫苗使用方面，国外父母代种鸡只在4～6周龄免疫一次活疫苗，而国内则主要采取“一活一死”或“一活两死”的免疫程序。疫苗的免疫效果需进行有效的抗体检测，才能达到防控滑液囊支原体感染的目的，但是现有的检测方法中抗原的特异性及敏感性较差，无法有效开展疫苗的抗体评价。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种检测滑液囊支原体抗体的包被抗原、试剂盒及其检测方法。

为实现上述目的，本发明采取以下的技术方案：

第一方面，本发明提供一种检测滑液囊支原体抗体的包被抗原，所述包被抗原为重组EFG蛋白；所述重组EFG蛋白的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示序列；所述重组EFG蛋白的核苷酸序列包括如SEQ ID NO：2所示序列。

进一步的，所述重组EFG蛋白的氨基酸序列包含与SEQ ID NO：1具有至少90％同源性的序列；所述重组EFG蛋白核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少90％同源性的序列。

进一步的，所述重组EFG蛋白的氨基酸序列包含与SEQ ID NO：1具有至少95％同源性的序列；所述重组EFG蛋白核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少95％同源性的序列。

优选的，所述重组EFG蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示序列；所述重组EFG蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示序列。

进一步的，所述重组EFG蛋白的扩增引物序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示序列：

SEQ ID NO：3：5’-ATGGCACGTGATTATGATCTGAAAG-3’；

SEQ ID NO：4：5’-TTCTTCATCTTTATTCTGAATATTAC-3’。

第二方面，本发明提供一种检测滑液囊支原体抗体的试剂盒，所述试剂盒包括以上述重组EFG蛋白作为酶标板的包被抗原。

进一步的，所述试剂盒还包括酶标板、包被液、封闭液、酶标二抗、TMB显色液、终止液、洗涤液、血清稀释液。

进一步的，所述包被液为碳酸盐缓冲液。

进一步的，所述洗涤液为PBST。