[发明专利]一种检测滑液囊支原体抗体的包被抗原、试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种检测滑液囊支原体抗体的包被抗原，其特征在于，所述包被抗原为重组EFG蛋白；所述重组EFG蛋白的氨基酸序列包括如SEQ ID NO：1所示序列；所述重组EFG蛋白的核苷酸序列包括如SEQ ID NO：2所示序列。

2.根据权利要求1所述的检测滑液囊支原体抗体的包被抗原，其特征在于，所述重组EFG蛋白的氨基酸序列包含与SEQ ID NO：1具有至少90％同源性的序列；所述重组EFG蛋白核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少90％同源性的序列。

3.根据权利要求1所述的检测滑液囊支原体抗体的包被抗原，其特征在于，所述重组EFG蛋白的氨基酸序列包含与SEQ ID NO：1具有至少95％同源性的序列；所述重组EFG蛋白核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2具有至少95％同源性的序列。

4.根据权利要求1所述的检测滑液囊支原体抗体的包被抗原，其特征在于，所述重组EFG蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：1所示序列；所述重组EFG蛋白的核苷酸序列为SEQ IDNO：2所示序列。

5.根据权利要求1所述的检测滑液囊支原体抗体的包被抗原，其特征在于，所述重组EFG蛋白的扩增引物序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示序列：

SEQ ID NO：3：5’-ATGGCACGTGATTATGATCTGAAAG-3’；

SEQ ID NO：4：5’-TTCTTCATCTTTATTCTGAATATTAC-3’。

6.一种检测滑液囊支原体抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～5所述的检测滑液囊支原体抗体的包被抗原。

7.根据权利要求6所述的检测滑液囊支原体抗体的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶标板、包被液、封闭液、酶标二抗、TMB显色液、终止液、洗涤液、血清稀释液。

8.根据权利要求7所述的检测滑液囊支原体抗体的试剂盒，其特征在于，所述包被液为碳酸盐缓冲液；所述洗涤液为PBST；所述酶标二抗为羊抗兔酶标二抗；所述封闭液为5％脱脂奶粉；所述血清稀释液为5％脱脂奶粉。

9.采用权利要求6～8所述的试剂盒检测滑液囊支原体抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1；将包被抗原用包被液稀释后放入酶标板内，包被过夜；

S2：去除S1中的包被液，洗涤液清洗后拍干，加入封闭液封闭；

S3：去除S2中的封闭液，洗涤液清洗后拍干，加入用血清稀释液稀释后的待测血清样品，孵育；

S4：去除S3中的血清样品，洗涤液清洗后拍干，加入稀释后的酶标二抗，孵育；

S5：去除S4中的酶标二抗，洗涤液清洗后拍干，加入TMB显色液避光反应，反应结束后加入终止液终止反应；

S6：在酶标仪上测试酶标板孔中液体OD_450nm值，OD_450nm值≥0.3998时，检测结果判定为阳性；当待检样品的OD_450nm值＜0.3998时，检测结果判定为阴性。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，S1中包被抗原包被液稀释后浓度为0.8μg/mL，酶标板孔中每孔加入100μL，4℃包被过夜。