[发明专利]ST3GAL6-AS1基因的应用及特异性引物对和试剂盒

说明书

本发明公开了ST3GAL6‑AS1基因的应用及特异性引物对和试剂盒，针对ST3GAL6‑AS1基因的特异性引物对，包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，试剂盒包括如针对ST3GAL6‑AS1基因的特异性引物对。本发明首次将ST3GAL6‑AS1基因作为MM和MRD的检测标志物，将其用于多发性骨髓瘤、多发性骨髓瘤残留检测，不仅具有高灵敏度、高特异性，且能够实现无创检测；本发明所述试剂盒不仅可以应用于定性检测MM和MRD，还可以通过与内参基因的比较，定量测定患者体内肿瘤细胞的侵袭、迁移能力。

技术领域

本发明涉及多发性骨髓瘤检测技术领域，具体涉及ST3GAL6-AS1基因的应用及特异性引物对和试剂盒。

背景技术

多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)占血液系统恶性肿瘤的10％，占所有恶性肿瘤的1％。MM是一种浆细胞恶性克隆性肿瘤，尽管近年来雷那度胺、硼替佐咪等新药疗效显著，但其仍无法治愈，所有患者终将复发。其主要原因在于经过常规治疗后患者体内仍然存在微小残留病(minimal residual disease，MRD)，MRD被认为是复发的根源。MRD直接指导治疗并判断预后，因此需要对MRD进行监测。目前常用的MRD检测手段是采集骨髓样本进行细胞形态学检测和流式细胞免疫分型，但存在着不足之处：①MM具有独特的组织分布特征即瘤细胞在髓内浸润和增殖程度不同，呈灶状分布，常需要多次穿刺才能检出阳性结果，并且多次检测结果间变异较大。②细胞形态学主观性较强，不易于良恶性浆细胞的鉴别。并且化疗后骨髓瘤细胞数量骤减，即使人工分类细胞数超出日常检测数目仍难以准确地计数瘤细胞的数量。③因各实验室仪器状态和人员技术水平存在较大差异使得流式细胞术的检测方案和监测指标较难统一。并且即使目前高端的多色流式细胞术(八色到十色)的灵敏度仍为10^-4。

目前关于MM MRD的检测指标主要是骨髓瘤细胞表面分子的表达模式和免疫球蛋白基因的克隆性重排。表面分子表达模式异常的浆细胞并不能等同于肿瘤性浆细胞，并且该指标只能通过流式细胞术检测，受限于该技术的灵敏度。免疫球蛋白基因的克隆性重排目前主要通过二代测序检测，检测的成本太高，不利于临床推广应用。上述指标集中在反映骨髓瘤细胞增殖能力的强弱，但MM进展、复发、耐药的重要原因是其具有很强的侵袭迁移性。正如其名，多发性骨髓瘤以在骨髓内播散骨髓瘤细胞形成多发灶为特征。因此从侵袭迁移角度找到反映疾病转归的标志物，将会是一个重大突破。

唾液酸转移酶ST3GAL6是介导黏附的关键分子，St3gal6-null小鼠结合选择素的能力明显减弱。既往关于ST3GAL6的研究主要集中在实体肿瘤中，它的过表达发挥促癌作用：促进肝癌细胞的生长、迁移和侵袭，介导结肠癌的转移、影响预后，在乳腺癌细胞和组织中过表达并促进转移，是患者预后的独立影响因素。然而关于ST3GAL6在MM中的作用研究，目前少有报道：在MM患者中，ST3GAL6过表达且与整体生存率低有关；在MM细胞株中，ST3GAL6呈过表达，将其敲减后骨髓瘤细胞表面的α-2,3唾液酸水平显著降低，与骨髓基质细胞、纤维连接蛋白的黏附均显著减少，同时跨内皮细胞迁移明显减弱。同时，骨髓瘤处于缺氧环境中时，ST3GAL6的表达量会增加。但ST3GAL6为非分泌蛋白质，主要分布于细胞内，几乎不能分泌到血浆中，因此不能实现无创检测。

现有技术中关于MM和MRD的检测指标研究较少，因此，进一步寻找并研究MM和MRD中能够作为标志物的相关基因，以实现MM和MRD无创检测。

发明内容

本发明的目的在于提供ST3GAL6-AS1基因的应用，本发明首次将ST3GAL6-AS1基因作为高灵敏度、高特异性的MM微小残留检测(MRD)的检测标志物。并且由于ST3GAL6-AS1是LncRNA，可通过血浆检测游离核酸，故能够实现无创检测。

此外，本发明还提供上述ST3GAL6-AS1基因的特异性引物对以及包括上述特异性引物的试剂盒。

本发明通过下述技术方案实现：