[发明专利]一种氨基末端B型利钠肽前体的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒制备方法及检测应用在审
| 申请号： | 202111323722.7 | 申请日： | 2021-11-10 |
| 公开（公告）号： | CN114280311A | 公开（公告）日： | 2022-04-05 |
| 发明（设计）人： | 王保全 | 申请（专利权）人： | 宏葵生物（中国）股份有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/74 | 分类号： | G01N33/74;G01N33/58;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/535;G01N21/76 |
| 代理公司： | 济南誉丰专利代理事务所(普通合伙企业) 37240 | 代理人： | 李茜 |
| 地址： | 250000 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 氨基 末端 型利钠肽前体 纳米 微粒 化学 发光 检测 试剂盒 制备 方法 应用 | ||
1.一种NT-proBNP的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括：
包被有第一NT-proBNP单克隆抗体的磁性微粒；
碱性磷酸酶标记的第二NT-proBNP单克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述第一NT-proBNP单克隆抗体具体为NT-proBNP单抗1G4。
3.根据权利要求1所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述磁性微粒的粒径为1μm。
4.根据权利要求1所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述第二NT-proBNP单克隆抗体具体为NT-proBNP单抗8F10。
5.根据权利要求1-4任一项所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒，其特征在于，所述纳米磁微粒化学发光检测试剂盒中还包括：Tris缓冲液和化学发光底物AMPPD。
6.权利要求1-5任一项所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将第一NT-proBNP单克隆抗体通过标记反应，偶联上生物素，得到生物素化的第一NT-proBNP单克隆抗体；然后将生物素化的第一NT-proBNP单克隆抗体与链霉素亲和素修饰的磁性微粒进行偶联反应，得到包被有第一NT-proBNP单克隆抗体的磁性微粒；与包被缓冲液共同组成M试剂；
(2)将第二NT-proBNP单克隆抗体通过标记反应，标记上碱性磷酸酶，得到碱性磷酸酶标记的第二NT-proBNP单克隆抗体；与Tris缓冲液共同组成R试剂。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述包被缓冲液为添加蛋白稳定剂和血清检测阻断剂。
8.权利要求1-5任一项所述的纳米磁微粒化学发光检测试剂盒在非治疗性或诊断性检测氨基末端B型利钠肽前体NT-proBNP含量中的应用。
9.一种检测NT-proBNP含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
将包被有第一NT-proBNP单克隆抗体的磁性微粒、碱性磷酸酶标记的第二NT-proBNP单克隆抗体、Tris缓冲液和待测样品混合，在37℃温育反应5min；通过磁场分离除去未结合的物质；然后加入化学发光底物AMPPD，对反应中所产生的相对发光强度进行测量，基于相对发光强度与NT-proBNP浓度间的关系，对待测样品中的氨基末端B型利钠肽前体NT-proBNP含量进行测定。
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