[发明专利]一种乳酸氧化酶保护剂及乳酸氧化酶固定化方法

说明书

本发明提供了一种乳酸氧化酶保护剂，其包含乳酸氧化酶稳定剂，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％～15％、L‑氨基酸5％～10％、非还原性糖10％～20％，余量为水；所述L‑氨基酸选自L‑甘氨酸、L‑丝氨酸和L‑组氨酸中的至少一种。上述乳酸氧化酶保护剂能有效提高固定化过程中乳酸氧化酶的空间稳定性和保护氨基酸活性中心，提升制备得到的固定化乳酸氧化酶的酶活力，将这种固定化乳酸氧化酶涂覆在电极上用来测试溶液中乳酸含量具有灵敏度高、稳定性好等优点。此外，使用本发明乳酸氧化酶保护剂可有效缩短乳酸氧化酶的固定化时间，且反应条件温和，产物制备简单，固定化效率高。

技术领域

本发明属于固定化酶生物催化技术领域，具体涉及一种乳酸氧化酶保护剂及乳酸氧化酶固定化方法。

背景技术

乳酸氧化酶可将乳酸氧化为乳酸酸和过氧化氢，过氧化氢在电极附近发生氧化还原反应产生电流信号。据此，可通过制备特定的酶电极用来测试待测液中乳酸的含量。然而游离乳酸氧化酶稳定性差易失活，且容易从电极上流失。酶固定化是解决这一问题的良好策略。

酶共价结合固定化是以共价结合方式将酶固定到一个合适的载体，与非共价、吸附等方式的固定化方法相比，具有最强的结合力，可使酶在固定化体系中漏出更少。当选用载体无合适的结合活性基团，需要使用交联剂使载体与酶相关氨基酸残基共价结合。

目前，在乳酸氧化酶共价交联固定化中，传统固定方法存在以下缺陷：交联过程中酶活性中心的暴露，交联剂对酶活力的破坏。一般在固定化酶液中加入BSA提升酶液中蛋白质浓度可有效提升酶的稳定性，但由于乳酸氧化酶结构稳定性极差，易失活，BAS对此酶的保护作用并不理想。因此有必要寻求一种优的酶保护剂使固定化乳酸氧化酶具有更高的稳定性和活性。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种乳酸氧化酶保护剂，其能有效提高固定化过程中乳酸氧化酶的空间稳定性和保护氨基酸活性中心，提升制备得到的固定化乳酸氧化酶的酶活力。

具体技术方案为：

一种乳酸氧化酶保护剂，其包含乳酸氧化酶稳定剂，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％～15％、L-氨基酸5％～10％、非还原性糖10％～20％，余量为水；

所述L-氨基酸选自L-甘氨酸、L-丝氨酸和L-组氨酸中的至少一种。

在其中一些实施例中，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％～10％、L-氨基酸5％～10％、非还原性糖10％～15％，余量为水。

进一步地，所述乳酸氧化酶稳定剂包含以下质量百分含量的组分：多元醇5％、L-氨基酸10％、非还原性糖10％，余量为水。

在其中一些实施例中，所述L-氨基酸包括L-甘氨酸。

进一步地，所述L-氨基酸包括L-甘氨酸和L-丝氨酸。

进一步地，所述L-甘氨酸和L-丝氨酸的质量比为(1～3)：1。

进一步地，所述L-甘氨酸和L-丝氨酸的质量比为2:1。

在其中一些实施例中，所述多元醇选自甘油、丙二醇和山梨糖醇中的至少一种。

在其中一些实施例中，优选所述多元醇选自甘油。

在其中一些实施例中，所述非还原性糖选自海藻糖、松三糖和棉子糖中的至少一种。

在其中一些实施例中，优选所述非还原性糖选自棉子糖。

在其中一些实施例中，所述多元醇、L-氨基酸、非还原性糖的质量比为(1～5)：(1～10)：(1～10)。

在其中一些实施例中，优选所述多元醇、L-氨基酸、非还原性糖的质量比为1:2:2。