[发明专利]一种基于多肽Pep42构建的嵌合抗原受体免疫细胞制备及其应用

说明书

本发明提供了一种基于小分子环肽Pep42构建的嵌合抗原受体免疫细胞制备及其应用。具体地，本发明提供了一种基于Pep42改造的嵌合抗原受体(CAR)，所述的CAR含有一胞外结合域，所述的胞外结合域能够特异性地靶向细胞膜表面葡萄糖调控蛋白78(cell surface glucose‑regulated protein 78,csGRP78)等受体。本发明的CAR免疫细胞具有较强的特异性和靶点亲和力，因此对靶细胞的杀伤能力较强且安全性高。

技术领域

本发明属于免疫细胞治疗领域，具体涉及一种基于多肽Pep42构建的嵌合抗原受体免疫细胞制备及其应用。

背景技术

生物免疫治疗是一种新兴的，具有显著疗效的肿瘤治疗方法，是继手术、放疗、化疗后的第四大肿瘤治疗手段，它在不破坏机体免疫系统功能的前提下，通过特异性识别肿瘤细胞，进而消灭组织中的肿瘤细胞而实现治疗肿瘤的目的。免疫细胞疗法是生物免疫治疗中的一种重要类型，其中，又以过继免疫细胞治疗发展最为迅猛。嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor-Tcell,CAR-T)疗法是一种常见的过继免疫细胞疗法，该方法直接将可识别肿瘤抗原的基因片段(包括纳米抗体、单链抗体、细胞因子和配体等)与T细胞活化所需信号分子(包括CD3ζ链、CD28和4-1BB等共刺激分子)基因结合，构建成嵌合抗原受体(CAR)，通过基因转导的方式导入并修饰T细胞，赋予T细胞识别肿瘤抗原并迅速活化杀伤肿瘤细胞的能力，能有效规避MHC的限制性。目前，CAR-T疗法在血液恶性肿瘤治疗方面取得了巨大成功，实体瘤治疗方面，存在CAR-T归巢难，肿瘤微环境抵抗和缺少肿瘤特异性或相关性抗原等问题，亟待解决。

内质网应激是细胞应对内质网蛋白积累产生的一种应答形式，可诱发未折叠蛋白反应(UPR)，即细胞通过减少蛋白质合成，促进蛋白质降解，增加内质网分子伴侣表达等方式缓解内质网压力，内质网应激持续时间过长或过强，超过细胞自身未折叠蛋白反应的调节能力，将会引起细胞代谢紊乱和凋亡等。肿瘤微环境中，由于缺氧、葡萄糖饥饿和酸中毒等不利因素的存在常引起内质网应激反应，肿瘤细胞通过激活未折叠蛋白反应来适应这些不利条件，避免死亡。葡萄糖调节蛋白78(GRP78)又称Bip蛋白，由HSPA5基因编码，是内质网未折叠蛋白反应的关键分子。在内质网应激下，GRP78可大量表达并促进蛋白质正确折叠，缓解内质网压力，具有极强的抗细胞凋亡能力。大量文献证明，GRP78在肺癌、肝癌、结直肠癌等多种实体瘤细胞中表达上调，并部分转移到细胞膜表面参与PI3K/AKT和JAK2/STAT3等信号通路的激活调控。GRP78细胞膜转移的特性在正常细胞中很少见，提示csGRP78可作为CAT-T治疗实体瘤的抗原，理论上具有很好的特异性和安全性。

因此，靶向csGRP78构建有效工作的CAR-T对实体瘤或其它csGRP78表达异常相关性疾病的治疗具有重要价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种以基于环肽PEP42构建的嵌合抗原受体免疫细胞及其制备和应用方法。

在本发明的第一方面，提供了一种嵌合抗原受体(CAR)，其特征在于，所述的CAR含有一胞外结合域，所述的胞外结合域能够特异性地结合Pep42受体，并且所述的胞外结合域具有环肽结构。

在另一优选例中，所述的环肽结构是基于小分子环肽Pep42的环肽结构，并且特异性地结合Pep42受体。

在另一优选例中，所述的CAR的胞外结合域除了含有针对Pep42受体的具有环肽结构的第一胞外结构域之外，还包括针对额外靶点的第二胞外结构域。

在另一优选例中，所述的额外靶点为肿瘤特异性靶点。

在另一优选例中，所述的环肽结构位于胞外结合域的末端(即N端)或中间。

在另一优选例中，所述环肽结构的长度为12-15个氨基酸；较佳地13-15个氨基酸。