[发明专利]二倍半萜类化合物的制备方法及其在抗临床耐药细菌方面的应用

权利要求书

1.二倍半萜类化合物作为制备抗临床耐药细菌药剂的应用，其特征在于，所述的二倍半萜类化合物结构式如式（Ⅰ）所示；

，式（Ⅰ）；

所述临床耐药细菌为ATCC 43300耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和ATCC 51299万古霉素耐药粪肠球菌。

2.根据权利要求1所述的二倍半萜类化合物作为制备抗临床耐药细菌药剂的应用，其特征在于，所述的二倍半萜类化合物的制备方法包括如下步骤：

步骤（1），将真菌Emericella sp. XL029使用大米固体培养基进行培养，静置培养28-30天，得到发酵产物；

步骤（2），用甲醇萃取步骤（1）得到的发酵产物，将所得到的萃取液减压浓缩得到粗浸膏；

步骤（3），将步骤（2）得到的粗浸膏用水溶解后，用乙酸乙酯反萃，取乙酸乙酯相减压浓缩，得到浸膏；

步骤（4），将步骤（3）得到的浸膏干法上样至正相硅胶柱，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到7个组分A–G；

步骤（5），将步骤（4）得到的组分B干法上样至正相硅胶柱层析，然后进行梯度洗脱，收集各梯度的梯度洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分，得到5个亚组分B1–B5；

步骤（6），对步骤（5）得到的亚组分B1进行纯化，得到式（Ⅰ）所示的二倍半萜类化合物。

3.根据权利要求2所述的二倍半萜类化合物作为制备抗临床耐药细菌药剂的应用，其特征在于，步骤（2）中，萃取方式是加入等体积甲醇在室温条件下超声0.9-1.1h，然后室温条件下静置9-11h，取上清，减压浓缩；萃取次数为2-4次。

4.根据权利要求2所述的二倍半萜类化合物作为制备抗临床耐药细菌药剂的应用，其特征在于，步骤（3）中，所用的水和乙酸乙酯的体积相同。

5.根据权利要求2所述的二倍半萜类化合物作为制备抗临床耐药细菌药剂的应用，其特征在于，步骤（4）中，浸膏干法上样的具体方法为：将浸膏用10倍体积甲醇溶解后，用浸膏等质量80-100目硅胶吸附拌样后上样；

所述的正相硅胶柱中装柱硅胶为100-200目的正相硅胶；

梯度洗脱采用的流动相按洗脱顺序依次为石油醚、二氯甲烷和甲醇的混合溶剂、甲醇，二氯甲烷和甲醇的混合溶剂中二氯甲烷和甲醇的体积比依次为100:1、80:1、50:1、20:1、10:1，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，得到A–G共7个组分。

6.根据权利要求2所述的二倍半萜类化合物作为制备抗临床耐药细菌药剂的应用，其特征在于，步骤（5）中，浸膏干法上样的具体方法为：将组分B用10倍体积甲醇溶解后，用组分B等质量80-100目硅胶吸附拌样后上样；

所述的正相硅胶柱中装柱硅胶为100-200目的正相硅胶；

梯度洗脱采用的流动相为石油醚和乙酸乙酯，石油醚和乙酸乙酯的体积比依次为100:1、60:1、30:1、10:1、1:1，每个梯度洗脱到TLC点板无点后，更换下一梯度洗脱，得到B1–B5共5个亚组分。

7.根据权利要求2所述的二倍半萜类化合物作为制备抗临床耐药细菌药剂的应用，其特征在于，步骤（6）中，所述的纯化先采用经凝胶色谱纯化，再采用HPLC纯化。

8.根据权利要求7所述的二倍半萜类化合物作为制备抗临床耐药细菌药剂的应用，其特征在于，步骤（6）中，凝胶色谱纯化采用的凝胶柱为Sephadex LH-20，以体积比为1：1的二氯甲烷和甲醇的混合溶剂作为流动相，然后进行HPLC；

所述的HPLC色谱条件为流动相为体积比为19：1甲醇和水的混合溶剂，流速为1mL/min，收集开始出峰时间为5.6min的组分，采用安捷伦C₁₈反向色谱柱，规格为：4.6mmx250nm，5um；柱温：30℃，每次进样量：20ul，采用紫外检测器，检测波长为210nm。