[发明专利]鉴定甲状腺癌状态的方法和试剂盒

权利要求书

1.在受试者中鉴定甲状腺癌状态的方法，包括：

1)在来自所述受试者的生物样品中检测生物标志物基因的甲基化水平，其中所述生物标志物基因为：

NIS、TSHR和PTEN；

SLC5A8、RASSF1A和TIMP3；或者

NIS、TSHR、PTEN、SLC5A8、RASSF1A和TIMP3；以及

2)将1)中检测的甲基化水平与群体中相应生物标志物基因的正常甲基化水平进行比较，以确定所述受试者的甲状腺癌状态。

2.如权利要求1中所述的方法，其中所述甲状腺癌状态包括甲状腺癌的存在、分型、分期和/或分级。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中步骤1)中包括从所述生物样品提取DNA并以亚硫酸氢盐处理，使得所述DNA中的未甲基化胞嘧啶残基脱氨基，而甲基化的胞嘧啶残基保持不变，接着使用甲基化特异性引物对以所述生物标志物基因或其片段为模板进行扩增反应来确定所述甲基化水平。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中步骤1)中用于NIS基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：10和11或引物SEQ ID NO：14和15；用于TSHR基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：18和19或引物SEQ ID NO：22和23；用于PTEN基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：26和27或引物SEQ ID NO：30和31。用于SLC5A8基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：34和35或引物SEQ ID NO：38和39；用于RASSF1A基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：42和43或引物SEQ ID NO：46和47；用于TIMP3基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：50和51或引物SEQ IDNO：54和55。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中步骤1)中还包括利用引物对SEQ ID NO：7和8对内参基因ACTB进行检测。

6.如权利要求1-5中任一项所述的方法，其中步骤2)中确定所述受试者的甲状腺癌状态是根据所述生物标志物基因的甲基化水平通过逻辑回归进行的。

7.如权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述生物样品选自所述受试者的血液、血清、血浆、淋巴、尿和活检组织。

8.在受试者中检测甲状腺癌状态的试剂盒，包括用于检测来自所述受试者的生物样品中生物标志物基因甲基化水平的试剂，其中所述生物标志物基因为：

NIS、TSHR和PTEN；

SLC5A8、RASSF1A和TIMP3；或者

NIS、TSHR、PTEN、SLC5A8、RASSF1A和TIMP3。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其中用于检测甲基化水平的所述试剂包括用于通过扩增反应来确定所述甲基化水平的甲基化特异性引物对以及任选的亚硫酸氢盐。

10.如权利要求8或9所述的试剂盒，其中用于NIS基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：10和11或引物SEQ ID NO：14和15；用于TSHR基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：18和19或引物SEQ ID NO：22和23；用于PTEN基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：26和27或引物SEQ ID NO：30和31。用于SLC5A8基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：34和35或引物SEQ ID NO：38和39；用于RASSF1A基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：42和43或引物SEQ ID NO：46和47；用于TIMP3基因甲基化水平检测的引物对包括引物SEQ ID NO：50和51或引物SEQ ID NO：54和55。