[发明专利]FFPE样本DNA快速提取的方法

权利要求书

1.FFPE样本DNA快速提取的方法，其特征在于：包括以下几个步骤，

(1)将石蜡组织样本放入切片机切取5-10张切片，厚度为10μm，放入1.5mL离心管中，做好标记；

(2)在装有FFPE组织样本的1.5mL的离心管中加入裂解液buffer200ul、蛋白酶K 20ul和脱蜡液二甲基硅油50ul，涡旋震荡2min，4000r/min离心2min；

(3)水浴锅预热至56℃，将离心过的有FFPE组织样本在56℃条件下孵育1小时，然后水浴锅升温至90℃，继续孵育1小时，可观察到管中分层，上层为油相层，下层为水相层，孵育结束后，取出离心管冷却至室温，用移液器小心将下方水相溶液完全取出转移至另外一支1.5mL离心管中；

(4)在放有水相层的离心管中加入异丙醇200μL和磁珠20μL，混合均匀，室温反应5min；

(5)放磁力架上吸附去上清；

(6)加入400ul清洗液A，上下颠倒混匀30秒使磁珠充分悬浮，简短离心以去除管盖内壁的液滴，待磁珠完全吸附时，用移液器小心去除液体；

然后加入400ul清洗液B，上下颠倒混匀30秒使磁珠充分悬浮，简短离心以去除管盖内壁的液滴，待磁珠完全吸附时，用移液器小心去除液体；

(7)晾干磁珠约2min；

(8)加入50μL洗脱液进入离心管中，室温孵育2min；

(9)放磁力架上吸附取上清，上清即为最终核酸产物。

2.根据权利要求1所述FFPE样本DNA快速提取的方法，其特征在于：在步骤(3)和步骤(4)之间如果需要去除体系中的RNA，可在取出的水相溶液中加入2μl RNase A，室温放置5min即可。

3.根据权利要求1所述FFPE样本DNA快速提取的方法，其特征在于：所述裂解液Buffer含有:10mM EDTA、30mM Tris-HCl、3M异硫氰酸胍、Tween20。

4.根据权利要求1所述FFPE样本DNA快速提取的方法，其特征在于：所述蛋白酶K浓度为20mg/mL。

5.根据权利要求1所述FFPE样本DNA快速提取的方法，其特征在于：所述磁珠为二氧化硅磁珠。

6.根据权利要求1所述FFPE样本DNA快速提取的方法，其特征在于：所述清洗液A含有：1.0M NaCl，50mM MOPS和15％异丙醇。

7.根据权利要求1所述FFPE样本DNA快速提取的方法，其特征在于：所述清洗液B含有：50mM Tris-HCl，80％乙醇。