[发明专利]一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法

说明书

本发明一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法，其特征在于，包括播种培养基和增殖分化培养基，所述播种培养基配方包含：KC+6‑BA 1.5+NAA 0.6+蔗糖20+椰汁100+活性炭1+琼脂4.7，调节PH值为5.6±1；成分包含：KC基础培养基，6‑BA(6‑苄基腺嘌呤)1.5mg/L,NAA(萘乙酸)0.6mg/L，蔗糖20g/L，椰汁100mL/L，活性炭1g/L，琼脂4.7g/L；所述增殖分化培养基配方，成分包含：1/2MS基础培养基，NAA(萘乙酸)0.1mg/L，6‑BA(6‑苄基腺嘌呤)2mg/L,蔗糖20g/L，椰汁100ml/L，琼脂4.5g/L。本发明能使冬凤兰种子的萌发周期由常规播种的3‑5个月萌发缩短到80天，并且萌发率高，原球茎增殖能力强，速度快，质量高。

技术领域

本发明涉及组培技术领域，特别涉及一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法。

背景技术

冬凤兰(Cymbidium dayanum)为兰科兰属附生兰，总状花序，花葶外弯或下垂，其株形优美，花期持久，是一种有较高的开发利用价值的野生兰。由于生境的不断破坏以及人为的乱挖乱采，野生冬凤兰资源损失严重，自然分布急剧减少。因此，采用植物组织培养技术对冬凤兰进行扩繁和保存，对于其种质资源的保护及开发利用都有重要意义。

目前冬凤兰人工栽培多采用传统的分株繁殖法，繁殖系数极低，栽培数量受到限制，用常规的无菌播种方法存在操作繁杂、萌发率低、萌发周期比较长(3-5个月)等问题，严重阻碍了冬凤兰的开发利用进程。本发明针对以上缺点，进行了大量技术革新，提供了一种无菌播种培养基及一套简化的组培操作流程，能让冬凤兰种子的萌发周期缩短到80天，并且萌发率高，分化能力强，速度快，质量高。

发明内容

针对上述背景中的问题，本发明提供了一种冬凤兰无菌播种培养基配方及组织培养方法，以解决冬凤兰繁殖周期长、速度慢的问题，并提高冬凤兰萌发原球茎的质量。

一种冬凤兰无菌播种培养基配方，其特征在于，包括播种培养基和增殖分化培养基，所述播种培养基配方包含：

KC+6-BA 1.5+NAA 0.6+蔗糖20+椰汁100+活性炭1+琼脂4.7，调节PH值为5.6±1；

成分包含：KC基础培养基，6-BA(6-苄基腺嘌呤)1.5mg/L,NAA(萘乙酸)0.6mg/L，蔗糖20g/L，椰汁100mL/L，活性炭1g/L，琼脂4.7g/L；

所述增殖分化培养基配方，成分包含：

1/2MS基础培养基，NAA(萘乙酸)0.1mg/L，6-BA(6-苄基腺嘌呤)2mg/L,蔗糖20g/L，椰汁100ml/L，琼脂4.5g/L。

作为优选的，组织培养方法包括以下步骤：

S1、挑选授粉足8个月成熟未开裂的冬凤兰蒴果采摘后，用75％酒精擦拭干净；

S2、擦拭干净的蒴果置于超净工作台接种盘内，先将蒴果用浓度为75％的酒精浸泡30s，再用0.1％的升汞表面消毒15min，无菌水冲洗4次，干净后用无菌滤纸吸干水分待用；

S3、用消毒刀片切掉蒴果两头，纵剖开蒴果，将种子取出置于环保茶袋，再将茶袋整个泡进0.2mol/L NaClO中浸泡15min进行预处理；

S4、将预处理过的种子用无菌水冲洗两遍，将装种子的茶袋用消毒镊子撕开，用刀片轻轻从茶袋上刮下种子置于播种培养基表面，滴加1-2滴无菌水摇匀，让种子均匀播种在所述播种培养基表面；

种子播种后置于暗培养，直至开始萌发；

S5、待种子萌出长成原球茎，将原球茎接种到增殖分化培养基进行增殖，待增殖到一定数量，便可进行根芽分化培养。