[发明专利]一种劳森氏菌免疫胶体检测试纸条的组装方法

说明书

本发明公开了一种劳森氏菌免疫胶体检测试纸条的组装方法，劳森氏菌免疫胶体金检测试纸条由兔抗劳森氏菌多克隆抗体、羊抗鼠IgG、鼠抗劳森氏菌LscN单克隆抗体和NC膜制备；用鼠抗劳森氏菌LscN单克隆抗体制备金标探针，用兔抗劳森氏菌多克隆抗体作为检测线，用羊抗鼠IgG作为质控线，用PBS、1％BSA、0.2％Tween‑20、0.05mol/LNaCl溶液封闭NC膜，水洗并干燥；将以上组件组装成劳森氏菌免疫胶体金检测试纸条。本发明具有生产出的试纸条在特异性、敏感性和稳定性方面更加完善，检测更为高效、准确的优点。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体为一种劳森氏菌免疫胶体检测试纸条的组装方法。

背景技术

生物工程，是20世纪70年代初开始兴起的一门新兴的综合性应用学科，90年代诞生了基于系统论的生物工程，即系统生物工程的概念。

所谓生物工程，一般认为是以生物学的理论和技术为基础，结合化工、机械、电子计算机等现代工程技术，充分运用分子生物学的最新成就，自觉地操纵遗传物质，定向地改造生物或其功能，短期内创造出具有超远缘性状的新物种，再通过合适的生物反应器对这类“工程菌”或“工程细胞株”进行大规模的培养，以生产大量有用代谢产物或发挥它们独特生理功能一门新兴技术。

经过大量检索得知：中国发明专利：申请号【CN201811210468.8】；公开号【CN111053896A】一种降低与猪中细胞内劳森氏菌亚临床感染相关的平均日增重的负面影响的方法；本发明公开了一种降低与猪中细胞内劳森氏菌亚临床感染相关的平均日增重(ADWG)的负面影响的方法，包括向猪中全身施用包含非活细胞内劳森氏菌抗原和药学上可接受的载体的疫苗。其中所述方法用于减少在猪的整理期间对ADWG的负面影响。

中国发明专利：申请号【CN201680060974.6】；公开号【CN108135990A】；用于保护MDA阳性动物抵御由胞内劳森氏菌感染引起的病变的疫苗；本发明涉及用于向具有针对胞内劳森氏菌的母源抗体的动物皮内施用的包含灭活的胞内劳森氏菌抗原的疫苗，其用于保护所述动物抵御由胞内劳森氏菌感染引起的病变的方法中。

生物工程是分子遗传学、微生物学、细胞生物学、生物化学、化学工程和能源学等各学科的结合，其应用范围十分广泛。

基于生物工程的劳森氏菌免疫胶体金检测试纸条，现有的试纸条在进行检测时反应速度慢，检测出现误差的可能性相对较高，不够准确，使用时存在一定的误差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种劳森氏菌免疫胶体检测试纸条的组装方法，具备生产出的试纸条在特异性、敏感性和稳定性方面更加完善，检测更为高效、准确的优点，解决了进行检测时反应速度慢，检测出现误差的可能性相对较高，不够准确，使用时存在一定的误差的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种劳森氏菌免疫胶体检测试纸条的组装方法，劳森氏菌免疫胶体金检测试纸条由兔抗劳森氏菌多克隆抗体、羊抗鼠IgG、鼠抗劳森氏菌LscN单克隆抗体和NC膜制备；

用鼠抗劳森氏菌LscN单克隆抗体制备金标探针，用兔抗劳森氏菌多克隆抗体作为检测线，用羊抗鼠IgG作为质控线，用PBS、1％BSA、0.2％Tween-20、0.05mol/LNaCl溶液封闭NC膜，水洗并干燥；将以上组件组装成劳森氏菌免疫胶体金检测试纸条。

作为本发明的进一步方案，劳森氏菌LscN蛋白的原核表达和纯化：

设计lscN全长引物，以劳森氏菌基因组为模板，PCR扩增全长，连接T载体，转化DH5α，提取质粒，测序，检测正确后连接pcold载体，构建原核表达载体，转化BL21，选取阳性克隆，小量表达，SDS-PAGE和western blot检测，大量表达，切GST标签。

作为本发明的进一步方案，兔抗劳森氏菌多克隆抗体的制备和纯化：