[发明专利]运用沼泽红假单胞菌表达壳聚糖酶的方法、壳聚糖酶、重组质粒、重组菌、发酵菌剂及应用

权利要求书

1.一种运用沼泽红假单胞菌表达壳聚糖酶的方法，其特征在于，

将编码枯草芽孢杆菌的壳聚糖酶基因序列构建重组质粒，重组质粒通过大肠杆菌接触转化至沼泽红假单胞菌菌体内，得到沼泽红假单胞菌重组菌，将沼泽红假单胞菌重组菌发酵培养，获得壳聚糖酶。

2.根据权利要求1所述的运用沼泽红假单胞菌表达壳聚糖酶的方法，其特征在于，

编码枯草芽孢杆菌的壳聚糖酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的运用沼泽红假单胞菌表达壳聚糖酶的方法，其特征在于，

沼泽红假单胞菌重组菌发酵培养包括：

将沼泽红假单胞菌重组菌于含有50μg/mL的硫酸卡拉霉素的发酵培养基中，25～30℃，5～25W(色温3000～6500K)的日光灯，厌氧光照培养7～10天，获得壳聚糖酶；

发酵培养基包括：NaAC 0.5g/L～2g/L，草酸铵0.5g/L～2g/L，yeast extract 0.5g/L～4g/L，FeSO₄·7H₂O 0.0005g/L～0.05g/L，Na₂MoO₄ 0.01g/L～0.05g/L。

4.一种根据权利要求1至3任一项所述的运用沼泽红假单胞菌表达壳聚糖酶的方法获得的壳聚糖酶，其特征在于，

其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

5.根据权利要求4所述的壳聚糖酶，其特征在于，

所述壳聚糖酶属于糖苷水解酶GH46家族，其分子量为31.443KD，酶活性(效价)为51U/mL。

6.一种重组质粒，其特征在于，包括权利要求1所述的编码枯草芽孢杆菌的壳聚糖酶基因和pBBR1MCS-2质粒。

7.一种沼泽红假单胞菌重组菌，其特征在于，包括权利要求6所述的重组质粒。

8.根据权利要求7所述的沼泽红假单胞菌重组菌，其特征在于，

沼泽红假单胞菌重组菌的制备包括：

将重组质粒热击转换大肠杆菌WM3064，阳性转化子与沼泽红假单胞菌共培养3～7天，将共培养菌从培养基平板上洗脱，再涂布到含有硫酸卡拉霉素的培养基平板上，筛选沼泽红假单胞菌重组菌。

9.一种包括权利要求7或8所述的沼泽红假单胞菌重组菌的发酵菌剂，其特征在于，

沼泽红假单胞菌重组菌在含有50μg/mL的硫酸卡拉霉素的液体发酵培养基中，25～30℃，5～25W(色温3000～6500K)的日光灯，厌氧光照条件下培养至对数生长期，获得培养物，再向培养物添加1～2％的壳聚糖溶液，继续培养5～7天，获得发酵菌剂。

10.一种包括权利要求9所述的发酵菌剂在辣椒促生长中的应用，其特征在于，

将添加了0.1～2％的壳聚糖溶液的重组菌培养5～7天后，重组菌液体菌剂稀释200～1000倍后在辣椒幼苗期、花蕾期和花期喷施，或者灌根使用。