[发明专利]一种C-kit和PDGFR突变检测试剂盒

说明书

本发明属于基因突变检测技术领域，具体公开了一种C‑kit和PDGFR突变检测试剂盒，包括PCR反应液、PCR反应条A、PCR反应条B和石蜡油；所述PCR反应液放置于1.5ml可立螺帽离心管内，PCR反应液组分包括Taq酶、dNTPs、Mg2+和Buffer；所述PCR反应条A和PCR反应条B放置于PCR八联管内，PCR反应条A和PCR反应条B包括引物、探针和石蜡；所述石蜡油同样放置于1.5ml可立螺帽离心管内；本试剂盒可定性检测样本中c‑kit和PDGFRα基因可能存在的绝大多数突变类型，检测通量高，理论上只要PNA Blocker结合的序列中存在突变，即可检出；灵敏度可达到5％；操作简单，检测时间短，检测成本低。既解决了常规ARMS‑PCR方法通量低的问题，又具有较高检测灵敏度，检测成本、检测周期也远低于二代测序。

技术领域

本发明涉及基因突变检测技术领域，具体为一种C-kit和PDGFR突变检测试剂盒。

背景技术

c-kit基因位于人染色体4q12-13，属于原癌基因，其产物是受体酪氨酸激酶Ⅲ型，C-KIT是酪氨酸激酶受体蛋白家族的重要成员之一，其作为干细胞因子的受体，可以通过一系列信号通路参与造血干细胞增殖分化的调控。近年来研究发现，c-kit基因存在突变，特别是激活性突变与急性白血病中的发病、治疗和预后等密切相关。

胃肠道间质瘤(GIST)是消化道最常见的间叶源性肿瘤。绝大部分的GIST 均表达c-kit基因编码的Kit蛋白(CD117)。在分子层面上，大部分的GIST 均存在c-kit基因突变，从而导致Kit蛋白的活化不需要配体SCF参与就能刺激肿瘤细胞的持续增殖和抗凋亡信号的失控。

GIST中c-kit基因突变率约为90％，且突变形式多样。其中位于11号外显子Lys550-Val560区段的变异最为常见(约占70-80％)，位于9号外显子 Ala502-Tyr503区段的6碱基重复突变约占5-10％。临床研究表明GIST中c-kit 基因的突变情况与格列卫分子靶向治疗的疗效相关：存在11号外显子突变患者的疗效最好，存在9号外显子突变的患者疗效次之，而野生型GIST的疗效最差。另外，对于9号外显子突变的患者，提高用药剂量可显著提高疗效。检测c-kit基因突变对于指导GIST患者的合理用药，具有重要的参考价值。

PDGFRα为原癌基因，编码血小板源生长因子受体α，在器官发育、伤口愈合及肿瘤发展等方面起重要作用；其在胃肠道间质瘤(GIST)中有较大表达概率，常作为GIST诊断的指标物质；在突变的类型中，GIST中最常见的单发PDGFRA的突变是点突变D842V(62.6％)，导致第842位天门冬氨酸为缬氨酸所取代；最常见的移码突变是缺失突变DIMH842-845和IMHD843-846，而这两种突变在蛋白表达上相同，占所有PDGFRA突变的14.9％。

肿瘤基因突变的常见检测方法包括ARMS-PCR法、Sanger测序法、二代测序法、数字PCR法等。AMRS-PCR法和数字PCR只能针对已知突变进行检测，检测通量非常有限。Sanger测序法是突变检测的金标准，但灵敏度只能达到 5％～20％。二代测序技术在检测通量和灵敏度方面均具有较大的优势，但检测方法繁琐，需要昂贵的仪器设备，且检测周期也较长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种C-kit和PDGFR突变检测试剂盒，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种C-kit和PDGFR突变检测试剂盒，包括PCR反应液、PCR反应条A、PCR反应条B和石蜡油；所述 PCR反应液放置于1.5ml可立螺帽离心管内，PCR反应液组分包括Taq酶、 dNTPs、Mg2+和Buffer；所述PCR反应条A和PCR反应条B放置于PCR八联管内，PCR反应条A和PCR反应条B包括引物、探针和石蜡；所述石蜡油同样放置于1.5ml可立螺帽离心管内。

本发明该提供了一种C-kit和PDGFR突变检测试剂盒的检测方法，包括以下步骤：