[发明专利]一种tsRNA分子及其应用

说明书

本发明公开了一种tsRNA分子及其应用。该新型分子与多发性骨髓瘤有关，命名为tRF‑1:22‑Cys‑GCA‑17，二代测序及qPCR验证确定了其在多发性骨髓瘤中表达上调，该tsRNA分子在以往对于多发性骨髓瘤、其他类型肿瘤及非肿瘤的研究中均尚未被发现，因此具有较好的创新性。另一方面，ROC曲线显示了该tsRNA的诊断价值，生存分析提示tRF‑1:22‑Cys‑GCA‑17高表达的多发性骨髓患者预后不良，初步的细胞实验也验证了tRF‑1:22‑Cys‑GCA‑17在骨髓瘤细胞株中的作用机制，这一发现为临床诊断及预后分层提供了新的标记，并可能成为将来精准化治疗的新靶点，具有较好的临床应用价值。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种多发性骨髓瘤相关的tsRNA分子及其应用。

背景技术

多发性骨髓瘤(MM)是一种克隆增殖性浆细胞肿瘤，常表现为贫血、骨痛、肾功能不全、感染、出血、神经症状等，在血液恶性肿瘤中发病率位居第二位。流行病学数据显示我国15岁以上人群中多发性骨髓瘤发病率和死亡率随年龄增长呈上升趋势，尤其对于60岁以上年龄组。而尽管随着医疗技术的发展，各种新型药物如蛋白酶体抑制剂、CD38单克隆抗体、CART细胞治疗的出现改善了预后，但多发性骨髓瘤仍是一种不可治愈的疾病。在人口老龄化的当代，该疾病极大的威胁着公众健康并成为社会和家庭的经济负担。MM的发病机制复杂，涉及细胞遗传学异常、染色体易位、致癌基因的激活及骨髓微环境改变等，发现新的发病机制、寻找可能的治疗靶点对优化多发性骨髓瘤的全程管理具有重要意义。

非编码RNA是一类不编码蛋白质的RNA，在以往的研究中，多种microRNA、lncRNA、circRNA被发现参与多发性骨髓瘤的发生发展。转移RNA(tRNAs)是在蛋白质生物合成过程中传递氨基酸到核糖体的管家ncRNA。近年来，随着高通量测序技术的发展，一类源自tRNA的小非编码RNA分子tsRNA(tRNA-derivedsmall RNA)正越来越受到关注。tsRNA是由特定核酸内切酶对tRNA前体或成熟体加工而成，根据不同酶切位点分为tiRNAs(tRNA halves)和tRFs(tRNA-derived fragments)，其中tiRNAs又分为5’-halves和3’-halves，而tRFs包括tRF-5、tRF-3、tRF-1及tRF-2。tsRNA广泛存在于各种组织细胞并且其表达水平具有高度组织、疾病和时序特异性，tsRNA生物学功能及其复杂，可以在转录和转录后水平调控基因表达。tsRNA参与多种分子过程如基因沉默、RNA加工、蛋白质翻译以及细胞应激、细胞生长、细胞分化等不同生理过程，这些功能性tsRNA作为癌症的新的生物标志物和治疗靶点也具备较大的潜力。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种多发性骨髓瘤相关的tsRNA分子。tsRNA在多发性骨髓瘤病程中的相关研究少有报道。本发明利用高通量测序鉴定出一种在多发性骨髓瘤中异常表达的新型tsRNA分子，命名为tRF-1:22-Cys-GCA-17。

本发明的多发性骨髓瘤相关的tsRNA的cDNA分子序列为：

GGGGATATAGCTCAGGGGTAGA。见SEQ ID NO.1所示。

本发明的第二个目的是提供上述的tsRNA分子的试剂的应用，用于制备多发性骨髓瘤诊断和/或预后制剂中的应用。本发明后续通过实时定量PCR(Real-timequantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)扩大样本验证，预后分析显示tRF-1:22-Cys-GCA-17高表达的多发性骨髓瘤患者预后不良。

进一步地，所述的检测tsRNA分子的试剂包括PCR试剂；引物序列优选如下：

F：5’-GCAGGGGGATATAGCTCAG-3’，见SEQ ID NO.2所示。

R：5’-GGTCCAGTTTTTTTTTTTTTTTCTAC-3’，见SEQ ID NO.3所示。