[发明专利]gga-miR-146a-5p的抑制物在制备抗J亚群禽白血病病毒感染药物中的应用

说明书

本发明涉及病毒学领域，提供了一种gga‑miR‑146a‑5p的抑制物在制备抗J亚群禽白血病病毒感染药物中的应用，该抑制物为gga‑miR‑146a‑5p的互补序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该抑制物可以阻断ALV‑J在细胞中的复制与增殖，可作为ALV‑J复制抑制剂应用，还可以制备成试剂盒和药物等配合净化应用，为抗ALV‑J的研究提供了新的思路和理论基础。

技术领域

本发明涉及病毒学和分子生物学领域,具体涉及gga-miR-146a-5p的抑制物在制备抗J亚群禽白血病病毒感染药物中的应用。

背景技术

J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)，是致癌性逆转录病毒，于1988年由英国科学家Payne及其同事等发现并分离。据报道ALV-J是一外源性白血病病毒与内源性E亚群病毒囊膜基因的重组体，在鸡群中可以通过垂直传播和水平传播。我国于1999年首次分离到ALV-J，近年来ALV-J的宿主范围逐步扩大可以感染我国各品系鸡群，并造成严重危害，已成为我国各种类型鸡群中危害最严重的ALV流行亚群。近年来，甚至在其他禽类体内也检测到了ALV-J阳性感染。由于ALV-J导致鸡的免疫抑制、生长迟缓及多种肿瘤，其传播率也远高于其他ALV亚群，并且动物机体对该病毒表现出免疫耐受，并且目前尚无有效疫苗和药物对其进行防治，从而使其控制和根除变得更加困难，因此需要开发针对ALV-J防治的新措施。

microRNA(miRNA)是一种非编码RNA，长度约为21-23个核苷酸左右，通过直接结合mRNA并影响翻译效率或mRNA丰度来控制蛋白水平。miRNA依靠其成熟体发挥作用。miRNA的成熟需要多个步骤，首先在聚合酶的作用下先转录为pri-microRNA,大多数miRNA的转录是由RNA聚合酶Ⅱ所介导的。pri-microRNA通过两次剪切形成成熟体的miRNA。当miRNA与靶mRNA几乎完全互补时可以导致靶mRNA的降解，此现象常见于植物；而在动物中，miRNA与靶mRNA互补程度较低，可以在不影响靶mRNA的表达下抑制翻译。有大量研究表明，miRNA参与了动植物各种的生理病理过程，包括发育的调节、细胞的增殖分化与免疫活动的调节、病毒感染的发生发展等几乎所有生命活动。

病毒侵入机体后，miRNA在病毒与宿主的互作过程中发挥着重要的调节作用。病毒与宿主都可以编码miRNA，病毒所编码的miRNA有利于帮助病毒规避宿主的免疫反应，而宿主所编码miRNA的则对病毒的入侵有着促进或抑制的作用。由于目前尚无有效疫苗和药物对ALV-J进行防治，因此开发一种可以有效抑制ALV-J复制的miRNA抑制物具有潜在的临床应用价值。

发明内容

本发明的发明人针对现有技术存在的空白之处，提供了一种gga-miR-146a-5p的抑制物在制备抗ALV-J病毒感染药物中的应用，该抑制物为gga-miR-146a-5p的互补序列，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，该抑制物可以阻断ALV-J在细胞中的复制与增殖，可作为ALV-J复制抑制剂应用，还可以制备成试剂盒和药物等配合净化应用。为抗ALV-J的研究提供了新的思路和理论基础。

发明人首先研究了ALV-J感染DF-1后细胞中gga-miR-146a-5p的表达情况，结果显示gga-miR-146a-5p的表达显著上调，基于这一发现，发明人设计并合成了gga-miR-146a-5p模拟物和抑制物，并以此为基础研究了其与ALV-J复制的关系：

gga-miR-146a-5p抑制物(inhibitor),其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示(aacccauggaauucaguucuca)，

gga-miR-146a-5p模拟物(mimics),其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示(ugagaacugaauuccauggguu)；