[发明专利]一种替度鲁肽的制备方法

说明书

本发明涉及多肽药物制备领域，具体涉及一种替度鲁肽的制备方法，主要包括以下步骤：用固相多肽合成法制备Met(O)替度鲁肽肽树脂，Met(O)替度鲁肽肽树脂经裂解还原得到替度鲁肽粗品；其中，偶联Met时采用Fmoc‑Met(O)‑OH，其余采用相应的保护氨基酸或片段。本发明采用Fmoc‑Met(O)‑OH代替传统的Fmoc‑Met‑OH进行偶联，可避免或降低Met发生氧化、烷基化副反应从而生成Met氧化和烷基化杂质的问题，提高总收率和纯度、降低总成本，且可将纯品中Met相关杂质控制在0.1％以内，具有广泛的市场前景。

技术领域

本发明属于多肽药物制备领域，具体涉及一种替度鲁肽的制备方法。

背景技术

短肠综合征(SBS)是指由于严重小肠疾病或外科手术切除大部分小肠导致机体无法正常吸收营养而引发的一系列综合征。SBS降低了患者摄取液体和营养物质的能力，导致他们脱水和营养不良。而肠外营养支持治疗又将增加全身感染和其他长期并发症的风险，迄今为止尚无药物可以治疗短肠综合征。

替度鲁肽，英文名为Teduglutide，是一种胰高血糖素样肽2(GLP-2)类似物，一种天然生成的激素，可减少胃排空和分泌，并调节小肠内膜细胞的生长、增殖和修复。临床试验表明，该药能够降低短肠综合征患者对胃肠外营养的需求，其结构式和肽序如下：

H-His¹-Gly²-Asp³-Gly⁴-Ser⁵-Phe⁶-Ser⁷-Asp⁸-Glu⁹-Met¹⁰-Asn¹¹-Thr¹²-Ile¹³-Leu¹⁴-Asp¹⁵-Asn¹⁶-Leu¹⁷-Ala¹⁸-Ala¹⁹-Arg²⁰-Asp²¹-Phe²²-Ile²³-Asn²⁴-Trp²⁵-Leu²⁶-Ile²⁷-Gln²⁸-Thr²⁹-Lys³⁰-Ile³¹-Thr³²-Asp³³-OH。

替度鲁肽主链氨基酸有33个，由于肽链较长且序列结构特殊导致在制备该产品的过程中多处容易发生副反应，进而对产品的收率、分离纯化、产品质量等产生较大的影响，如His在缩合过程中容易产生消旋副反应，形成[D-His¹]替度鲁肽杂质；Asp-Gly结构在酸性或碱性环境下容易发生重排，形成天冬酰亚胺结构，产生[Asu³]替度鲁肽杂质、[D-Asp³]替度鲁肽杂质、[iso-Asp³]替度鲁肽杂质；合成和裂解过程中，Met容易发生氧化、烷基化副反应，生成Met氧化和烷基化杂质。并且较长的肽链在偶联时若每步反应不完全，累积的副反应容易导致较多的杂质。因此，需要设计合理的制备路线来避开上述副反应的发生，提高粗品的纯度、纯化收率，最终提高总收率和纯度、降低总成本。

专利CN104072603A先合成替度鲁肽2-33位氨基酸片段，而后采用特殊保护基保护的His进行1位偶联，该方法减少了[D-His¹]替度鲁肽杂质生成，但与逐个氨基酸偶联的方法无异，操作步骤多，溶剂用量大，三废严重。