[发明专利]一种提高乳酰-N-岩藻五糖产量的基因工程菌及其生产方法有效
| 申请号： | 202111222784.9 | 申请日： | 2021-10-20 |
| 公开（公告）号： | CN113832092B | 公开（公告）日： | 2023-10-03 |
| 发明（设计）人： | 张涛;胡苗苗;江波;李梦丽 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/56;C12N15/54;C12N15/61;C12N15/53;C12N15/70;C12P19/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 岩藻五糖 产量 基因工程 及其 生产 方法 | ||
1.一种产乳酰-N-岩藻五糖的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌敲除β-半乳糖苷酶基因lacZ和UDP-葡萄糖脂质载体转移酶基因wcaJ，并过表达磷酸甘露糖变位酶基因manB，甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶基因manC，GDP-甘露糖-6-脱氢酶基因gmd，GDP-岩藻糖合成酶基因wcaG和α-1,2岩藻糖基转移酶基因futC；
所述基因工程菌还过表达UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因galE、半乳糖-1-磷酸尿苷转移酶基因galT，半乳糖激酶基因galK，过表达β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因lgtA和/或β-1,3-半乳糖基转移酶基因wbgO。
2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述β-1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶基因lgtA来源于脑膜炎奈瑟球菌，β-1,3-半乳糖基转移酶基因wbgO来源于大肠杆菌O55:H7，α-1,2岩藻糖基转移酶基因futC来源于幽门螺杆菌。
3.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述编码UDP-葡萄糖-4-差向异构酶基因galE、半乳糖-1-磷酸尿苷转移酶基因galT、半乳糖激酶基因galK、磷酸甘露糖变位酶基因manB、甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶基因manC、GDP-甘露糖-6-脱氢酶基因gmd和GDP-岩藻糖合成酶基因wcaG均来源于大肠杆菌K-12。
4.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌利用pCOLADuet-1、pACYCDuet-1、pCDFDuet-1或pETDuet-1质粒表达基因galE、galT、galK、lgtA、wbgO、manB、manC、gmd、wcaG和/或futC。
5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌利用pACYCDuet-1表达manB、manC、gmd和wcaG，利用pCDFDuet-1表达lgtA和wbgO，利用pETDuet-1表达galE、galT、galK和futC。
6.根据权利要求1～5任一所述的基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主。
7.权利要求1～6任一所述的基因工程菌在生产乳酰-N-岩藻五糖及含有乳酰-N-岩藻五糖的产品中的应用。
8.一种生产乳酰-N-岩藻五糖的方法，其特征在于，以乳糖和甘油为碳源，利用权利要求1～6任一所述的基因工程菌发酵生产乳酰-N-岩藻五糖。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，以0.2～1.0mM IPTG为诱导剂。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，发酵条件为，培养温度为24～38℃，搅拌转速250～850r/min，通气量0.8～1.2vvm，pH 6.5～7.0。
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