[发明专利]真核重组蛋白在试剂盒中的应用、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种真核重组蛋白在试剂盒中的应用、试剂盒及其应用。将真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白应用在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中，所述真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白由Sf9昆虫表达系统表达获得。本发明将由Sf9昆虫表达系统表达获得的真核重组Fiber‑1蛋白和/或真核重组Fiber‑2蛋白应用在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中，具有良好的FAdV‑4特异性、敏感性，能够特异地、有效地检测出感染FAdV‑4或免疫FAdV‑4疫苗的鸡群中抗FAdV‑4抗体，在FAdV‑4病毒流行病学调查中具有良好的应用价值，可用于FAdV‑4感染及免疫状况流行病学调查。

技术领域

本发明涉及血清4型禽腺病毒检测领域，具体地，涉及一种重组蛋白在制备用于检测血清4型禽腺病毒Fiber蛋白抗体的试剂盒中的应用以及试剂盒。

背景技术

禽腺病毒(Fowl Adenovirus，FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属，分为5个种(A-E)、12个血清型(1-7，8a，8b，9-11)。近年爆发的由高致病性血清4型禽腺病毒(FAdV-4)感染引起的肝炎-心包积液综合征给国内外养鸡业造成了巨大经济损失，然目前缺乏商品化的检测FAdV-4特异性抗体的血清学诊断技术。

Fiber蛋白不仅含腺病毒重要抗原表位决定簇，且在介导病毒与受体结合、诱导机体产生中和抗体方面具有重要作用。FAdV-4病毒粒子表面存在两种Fiber蛋白：Fiber-1和Fiber-2。目前虽有研究利用原核表达的Fiber-2重组蛋白作为标靶建立的FAdV-4的抗体ELISA检测方法，但是其检测准确率有限、效率低下，无法满足日常检测需要。

值得注意是，与原核表达系统不同，通过真核表达系统获得的重组蛋白与自然状态下的病毒蛋白在结构和修饰上更为接近，故动物体内产生的抗Fiber-1和Fiber-2蛋白的抗体与真核表达的蛋白的反应性与亲和性均高于原核表达蛋白。

目前尚无研究利用真核表达的Fiber-1和Fiber-2蛋白作为包被抗原的检测方法。

发明内容

针对目前利用原核表达的Fiber-2重组蛋白作为标靶建立的FAdV-4的抗体ELISA检测方法检测准确率有限、效率低下的问题，本发明提供了一种真核重组Fiber-1蛋白和/或真核重组Fiber-2蛋白在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中的应用、试剂盒及其应用，以FAdV-4的两个纤突蛋白Fiber-1、Fiber-2为检测靶点，利用昆虫细胞Sf9表达的真核重组Fiber-1、Fiber-2蛋白创制了更高效、灵敏且特异的血清学检测方法，为FAdV-4感染诊断和免疫监控提供技术支撑。

为了实现上述目的，本发明一方面提供一种真核重组Fiber-1蛋白和/或真核重组Fiber-2蛋白在制备用于检测Fiber蛋白抗体的试剂盒中的应用，其特征在于，所述真核重组Fiber-1蛋白和/或真核重组Fiber-2蛋白由Sf9昆虫表达系统表达获得。

与原核表达系统相比，本发明利用昆虫杆状病毒表达系统制备的重组Fiber-1、Fiber-2蛋白在Sf9昆虫细胞中实现高效易溶性表达，表达产物具有易于纯化、纯度高且无内毒素等优势。另外，该系统表达外源蛋白时具有完备的翻译后加工修饰能力，故在昆虫细胞上表达的真核重组Fiber-1、Fiber-2蛋白具有天然构象。故本发明表达的真核重组蛋白与其他原核表达的蛋白相比，它们不仅能更好地模拟FAdV-4天然免疫原，还与针对Fiber-1、Fiber-2的抗体具有更好的反应性和亲和力。

具体地，所述表达是将重组杆状病毒rBacmid-FAdV-4-Fiber-1、rBacmid-FAdV-4-Fiber-2分别感染Sf9细胞，收集细胞经重悬、破碎、离心、纯化后得到所述真核重组Fiber-1蛋白和所述真核重组Fiber-2蛋白。