[发明专利]一种高通量快速检测水样急性毒性的方法

权利要求书

1.一种高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(a)水样处理：浓缩水样中有机物；浓缩水样中的有机物，有利于减少水样中无机物，如金属离子的干扰；

(b)发光菌工作液制备：将发光菌接种于发光菌固体培养基上活化，挑取活化后的发光菌单菌落接种至发光菌液体培养基中培养，将培养后的发光菌菌液稀释制成发光菌工作液，工作液的发光量控制在10000～50000RLU；

(c)样品检测：在样品检测板中分别加入梯度浓度的参照化合物溶液、阴性对照液和梯度浓缩系数的样品，将96孔板至于通风橱中15～20min后迅速在每孔加入已知量发光菌工作液，室温静置15～20min，酶标仪检测每孔发光量(RLU)；

(d)毒性表征：根据式(1)计算各梯度浓度参照化合物和梯度浓缩系数样品的发光度抑制率IR，分别拟合参照化合物浓度和样品浓缩系数的剂量-效应曲线，获得产生x％抑制率时参照化合物的浓度和产生x％抑制率时样品的相对浓缩系数，根据式(2)计算样品毒性当量(TEQ)，样品毒性当量是将样品的急性毒性折算成产生同样急性毒性的参照化合物的浓度：

其中，EC_x参照化合物(以浓度表示)为产生x％抑制率时参照化合物的浓度，EC_x样品(以相对浓缩系数表示)为产生x％抑制率时样品的相对浓缩系数。

2.根据权利要求1所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述步骤(a)中水样的浓缩倍数不小于20倍。

3.根据权利要求2中所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述萃取处理包括液-液萃取或固相萃取。

4.根据权利要求3中所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述水样的液-液萃取方法可采用二氯甲烷或乙酸乙酯提取水样中有机物。

5.根据权利要求3中所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述固相萃取方法可采用Oasis HLB或C18固相萃取柱萃取水样，并用甲醇或乙酸乙酯洗脱。

6.根据权利要求1-5中任一所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述步骤(b)中培养指活化后的发光菌单菌落接种至发光菌液体培养基中20～25℃培养10～15h。

7.根据权利要求6中所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述步骤(b)中发光菌为明亮发光菌。

8.根据权利要求6或7中所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述步骤(c)中的参照化合物为氯化汞，氯化汞溶于甲醇中，其梯度溶液的浓度范围为0.2～2.4mg/L；阴性对照液为甲醇。

9.根据权利要求8中所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述步骤(c)中的参照化合物、阴性对照、样品的加样体积均为10μL，样品的加样体积不足10μL时用甲醇补足。

10.根据权利要求9中所述的高通量快速检测水样急性毒性的方法，其特征在于，所述方法还包括水样急性毒性级别评估体系：

a)TEQ≥0.07mg/L，其毒性等级为高毒；

b)0.007mg/L≤TEQ0.07mg/L，其毒性等级为低毒；

c)TEQ0.007mg/L，其毒性等级为无毒。