[发明专利]一种鳕鱼骨胶原蛋白活性肽的制备方法

说明书

本发明提供一种鳕鱼骨胶原蛋白活性肽的制备方法，包括以下步骤：S1原料预处理、S2辐射处理、S3酸处理、S4酶解、S5超声粉碎，本发明酶解提取的活性肽含量高，85.3～88.6mg/100g，其中分子量小于0.5kDa占比达到78.9％，在此分子量阶段的分子肽，能很好的被人体吸收保证肽功能性和活性。

技术领域

本发明涉及生物制品制备技术领域，特别涉及一种鳕鱼骨胶原蛋白活性肽的制备方法。

背景技术

鳕鱼属脊椎动物门(Vertebrata)、脊椎动物亚门(Subphylum Vertebrata)、真骨鱼纲(Division Teleostei)、鳕形目(Gadiformes)。鳕鱼多是生活在海洋底层和深海中下层的冷水性鱼类，广泛分布于世界的各大洋。其中鳕科和无须鳕科中有许多经济价值极高的世界级重要经济鱼类。

胶原是结缔组织中及其重要的一种结构蛋白，广泛存在于动物的骨、腱、肌鞘、韧带、肌膜、软骨和皮肤中，在提取胶原蛋白肽的加工过程中，酶水解是肽制备过程中的十分关键的环节，通过酶水解将大分子的胶原蛋白分解成分子量较小的胶原蛋白肽。但是目前公开的胶原蛋白肽制备方法中大都是只采用了一次水解，在水解过程中存在水解度不高、蛋白质利用率较低等缺陷，造成很多原料的浪费，而且水解度不高便会出现水解后的蛋白肽分子量较大，从而进行二次酶解，从而获取分子量较小的分子肽，经过多次酶解后使得蛋白肽含量损失，获得的活性肽含量较低。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种鳕鱼骨胶原蛋白活性肽的制备方法，解决上述问题。

本发明的技术方案是这样实现的：一种鳕鱼骨胶原蛋白活性肽的制备方法：包括以下步骤：

S1、原料预处理：将鳕鱼骨洗干净后，60～80℃水煮10～30min，过滤，取鱼骨浸泡于促渗剂中，浸泡时间12～24h，取出，粉碎，过120～180目，得到鱼骨粉；经过促渗剂浸泡能起到软化鱼骨的作用，有助于后续对可溶性胶原的提取，同时克服鱼骨胶原多肽的腥味、苦味、不良异味的缺点；

S2、辐射处理：将上述鱼骨粉经60Co-γ射线辐射处理，辐射剂量为30～40Gy，辐射剂量率为0.5～0.9Gy/min，辐射处理40～50min；经辐射处理后的鱼骨粉中的分子结构产生共振被活化，增强其分子间的结合力，活化骨粉中1-3kDa分子量的活性肽分子；

S3、酸处理：将S2辐射得到的骨粉与复合酸按质量体积比g/mL为2～6：0.3～0.9混合，在40～80℃下，摇床振荡60～100min，收集下层沉淀，上层为脱钙骨基质液；经过复合酸将鱼骨中的钙质脱离，

S4、酶解：将S3得到的脱钙骨基质液与复合酶在50～60℃、pH5～8下进行酶解1～3h，灭酶，收集水解液；

S5、超声粉碎：S4得到的水解液进行超声粉碎8～12min，进行超滤，得到胶原蛋白活性肽。

进一步的，所述S1的促渗剂为质量体积比g/mL为(0.3～0.8):(1.2～2.0):10的黑蒜多酚、薄荷醇、稀盐酸。

进一步的，所述S3复合酸为质量比为(0.1～0.3):(0.03～0.1):1的芳香酸、水杨酸和酒石酸。

进一步的，所述S4复合酶为质量比为(0.3～0.5):(1～4):(0.8～1.6)的碱性蛋白酶葡糖化酶和β-葡萄糖苷酶。

进一步的，所述S4脱钙骨基质液与复合酶的体积比为10～35:2～8。

进一步的，所述S5超声粉碎的频率为14～100KHz、功率为10～30w。

进一步的，所述S4的超滤为将超声后的水解液调至pH 6-7，在0.03～0.05MPa和23～30℃下超滤处理。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：