[发明专利]一种提取基因组脱氧核糖核酸的方法

说明书

本发明涉及基因组技术领域，具体涉及一种提取基因组脱氧核糖核酸的方法包括将生物组织进行研磨、涡旋混匀，得到第一浑浊液，采用缓冲液清洗第一浑浊液，离心分离，倒弃上清液，得到细胞沉淀；向细胞沉淀中加入裂解液，进行混匀、裂解、孵育，直至溶液无团块，得到悬浮液；向悬浮液中加入前处理后的磁性微球，涡旋混匀，振摇吸附10min，在磁场上分离磁性微球并用吸管取出上清液，采用乙醇洗涤磁性微球，得到吸附微球；向吸附微球中加入TE缓冲液进行脱附，磁场下分离磁性微球获得含有脱氧核糖核酸的洗脱液，本发明方法的操作步骤简单，无需使用对人体有害的有机物质，能够节省时间和资源，并获得高纯度的DNA片段，从而具有比较好的效果和产率。

技术领域

本发明涉及基因组技术领域，具体涉及一种提取基因组脱氧核糖核酸的方法。

背景技术

在传统的基因分型，转基因检测，品系检测试验中，人们比较惯用的方法是，采用手工抽提或是购买一般的基因组脱氧核糖核酸(DNA)提取试剂盒进行，但是不管是采用手工抽提还是购买试剂盒进行提取，整个提取过程都要取一定量的材料，经过液氮研磨，裂解液裂解，孵育，离心，有机抽提，漂洗晾干溶解这样的过程，最终得到基因组脱氧核糖核酸。

而往往这些基因组脱氧核糖核酸仅仅是用作基因鉴定的聚合酶链式反应模板，通过这种操作得到的基因组脱氧核糖核酸纯度和得率都是高的，但是即使不考虑使用液氮研磨时可能冻伤操作者的风险，整个提取过程由于步骤繁琐使用仪器众多，等待时间很长。

例如公告号CN101792756B的发明专利中涉及一种提取基因组脱氧核糖核酸的方法，通过在生物组织中加入裂解液，再加入蛋白酶k进行孵育，在通过离心分离的方法提取脱氧核糖核酸，但是此方法提取到的脱氧核糖核酸容易存有一定小分子的杂质，难以直接应用于检测，且整个提取过程由于步骤繁琐使用仪器众多，等待时间很长。

发明内容

本发明要解决的问题是提供一种效果较好、刺激性较弱、产率较好的提取基因组脱氧核糖核酸的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种提取基因组脱氧核糖核酸的方法，包括以下步骤：

步骤一：将生物组织进行研磨、混匀，得到第一浑浊液，采用缓冲液清洗第一浑浊液，离心分离，倒弃上清液，得到细胞沉淀；

步骤二：向步骤一中的细胞沉淀中加入裂解液，进行混匀、裂解、孵育，直至溶液无团块，得到悬浮液；

步骤三：向步骤二中的悬浮液中加入前处理后的磁性微球，混匀，振摇吸附，在磁场上分离磁性微球并用吸管取出上清液，采用乙醇洗涤磁性微球，得到吸附微球；

步骤四：向步骤三中的吸附微球中加入TE缓冲液进行脱附，磁场下分离磁性微球获得含有脱氧核糖核酸的洗脱液。

进一步的，所述裂解液包括以下组分：体积分数为1-4％的CHAPS、2-4mol/L的EDTA、2-4mol/L的盐酸胍或硫氰酸胍、和6-10mol/L尿素，CHAPS能够破坏蛋白分子的空间结构，并将蛋白酶解成小片段多肽，尿素在溶液中能够与多肽竞争氢键，同时能够破坏蛋白质的二级结构，增大蛋白分子非极性侧链在水中的溶解度，降低三维结构的疏水相互作用，导致其蛋白分子构象的改变，盐酸胍或硫氰酸胍类物质能够诱导蛋白质发生去折叠的作用，增加蛋白的溶解度，EDTA作为络合剂和洗涤剂能够破坏细胞膜，裂解液能够溶解细胞壁上的蛋白质，形成细胞壁空穴，胞膜也会从细胞壁孔结构进入的裂解液破碎，且能够将与DNA结合的蛋白进行分解，使DNA分子暴露出来，溶解在裂解液中。

进一步的，所述孵育条件为55-65℃下孵育5-30min，80-95℃加热3-10min。

进一步的，所述生物组织包括植物组织、动物组织或细菌的一种。

进一步的，所述磁性微球为二氧化硅、壳聚糖或琼脂糖包覆四氧化三铁制成。